[发明专利]含有多种内标准基因特异片段的DNA标准样品及其应用

说明书

本申请公开了一种含有多种内标准基因特异片段的DNA标准样品及其应用。所述DNA标准样品中含有11种内标准基因(元件)玉米zSSIIb、玉米Adh1、大豆Lectin、油菜CruA、油菜PEP、水稻SPS、水稻PLD、通用18sRNA、苜蓿ACC、甜菜GluA3、马铃薯UGPase的特异片段，分别如SEQ ID No.1—11所示，覆盖了七大作物玉米、大豆、油菜、马铃薯、甜菜、苜蓿、和水稻。本申请减少了检测中阳性标准样品的使用数量，降低了漏检的可能性。经检测，所述标准样品的均匀性、稳定性及定值等均符合要求，可用于相应内标准基因的日常检测中的质量控制、检测试剂的验证和评价，实验室能力验证活动等，可商业化推广应用。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体说是一种含有多种内标准基因特异片段的DNA标准样品。

背景技术

内标准基因是指具有物种特异性、拷贝数恒定、不显示等位基因变化的保守DNA序列。特定物种的内标准基因是区别其他物种的遗传标志，可用于物种及其产品鉴别、转基因成分检测等诸多领域。

内标准基因是转基因检测标识制度中所必需的检测参照基因，在检测系统中，通过PCR技术对待测样品的基因组DNA进行扩增，将被转入基因作为检测的对象，利用内标准基因作为对照，检测结果能够有效鉴定待测样品物种来源以及PCR检测系统工作正常与否，通过和转入基因的相对定量结果比较，可进一步实现样品中转入基因的基因组水平定量分析。

目前，质粒标准品含有的内标准基因种类单一，对同时检测多种作物的情况时，需要使用多种质粒，使用不便，且检测成本高。

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种含有多种内标准基因特异片段的DNA标准样品及其应用，本发明通过前期的信息检索和生物信息学分离，确定了11种内标准基因，通过检测这11个靶标可以覆盖玉米、大豆、油菜、马铃薯、甜菜、苜蓿、和水稻七大作物。本发明将这11个靶标的特异片段聚合构建到一个质粒分子上，获得了稳定可靠的阳性质粒标准样品。

为达到以上目的，本发明采取的技术方案是：

本发明首先提供一种检测转基因成分的的DNA标准样品，DNA标准样品包括多种内标准基因特异片段，分别为SEQ ID No.1—11所示DNA片段；分别为玉米zSSIIb(编码玉米淀粉合酶异构体zSTSII-2的基因)、玉米Adh1(乙醇脱氢酶基因)、大豆Lectin(植物凝集素基因)、油菜CruA(种子储藏蛋白基因)、油菜PEP(磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因)、水稻SPS(蔗糖合成酶基因)、水稻PLD(磷脂酶D家族基因)、通用18sRNA(真核生物18s核糖体RNA基因)、苜蓿ACC(苜蓿乙酰辅酶a羧化酶)、甜菜GluA3(谷蛋白基因)、马铃薯UGPase(尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶)上的特异片段。

在一种优选的实施方式中，所述SEQ ID No.1—11所示DNA片段按照SEQ IDNo.1—11的顺序依次连接。

在一种优选的实施方式中，所述DNA标准样品中的所述SEQ ID No.1—11所示DNA片段连接后的序列如SEQ ID No.12所示。

本发明还提供了包含以上任一所述DNA标准样品的重组载体。

在一种优选的实施方式中，所述重组载体的骨架载体选自pUC18、pUC19、pUC57中的一种或多种，更优选，pUC57，更优选，将所述DNA标准样品连接于pUC57平端酶EcoRV的酶切位点处。

本发明还提供了一种检测转基因成分的PCR试剂盒，所述试剂盒包括以上任一所述DNA标准样品或所述重组载体。

在一种优选的实施方式中，所述试剂盒还包括分别检测SEQ ID No.1—11所示DNA片段的引物组合；