[发明专利]一种血样中药物分子提取分离的萃取柱

说明书

本发明涉及血样处理技术领域，且公开了一种血样中药物分子提取分离的萃取柱，包括容杯、筛板、隔离腔、主填料腔和底塞，所述容杯位于主填料腔的上方且容杯的底端与主填料腔的顶端顺接为一个整体，容杯的内壁底部固定安装有筛板，主填料腔的内部填充有下填料层，所述主填料腔的内部且位于下填料层上方的容积与筛板的底部形成一个隔离腔。该血样中药物分子提取分离的萃取柱及其使用方法，不仅能有效去除蛋白大分子，还能去除磷脂、糖类、多肽和氨基酸等一系列亲水性物质，大大提高样品的洁净度，有效降低样品过滤液用于LC/MS/MS定量分析时所产生的基质效应，降低溶液的粘稠程度，进一步提高质谱的离子化效果，得到更高的灵敏度和回收率。

技术领域

本发明涉血样处理技术领域，具体为一种全血中药物提取分离的萃取柱及其使用方法。

背景技术

血样中既含有红血球细胞、白血球细胞、血小板、蛋白、各种营养物质、激素、维生素、电解质等，当用液质联用仪(LC/MS/MS)定量分析血样中的药物浓度时，血药中的内源物质会严重影响(主要是抑制)待测药物的离子化效率，使得待测物信号强度大幅降低甚至完全消失，即便通过液相色谱分离以后这种抑制也很少能完全消除，一般会残留50％～90％左右的抑制效应。因此，对血样中药物进行检测之前必须进行前处理，把待测物分子从中分离提取出来。

目前，血样前处理常用的方法有蛋白沉淀、液液萃取、以及各种固相萃取方法。由于蛋白沉淀法简单方便且不需要事先开发方法，90％以上的血样浓度分析都是采用蛋白沉淀法对血样进行前处理，得到的上层清液可以直接用于LC/MS/MS检测。然而，蛋白沉淀法不能排除血样中任何水溶性组分，因此不能消除基质效应，而且蛋白会吸附待测物质，严重时待测物90％以上被蛋白吸附掉，大大降低检测灵敏度，甚至完全检测不到。液液萃取和固相萃取方法一般只有在蛋白沉淀法因为基质效应或蛋白吸附使得待测物信号太弱或全无的情况下才使用，因为二者都必须经过复杂的开发过程，操作过程也费时费事，会大大增加检测成本。

本发明要解决的基质效应问题是指LC/MS/MS检测中影响待测物信号强度的效应，目前LC/MS/MS系统中的质谱仪基本上都采用大气压下喷雾离子化的离子源(API)，包括电喷雾(ESI)和常压下化学离子化(APCI)等，基质效应是在这种离子源中产生，其产生机理主要有两方面：①影响质谱仪中喷雾离子化的喷雾效率，②改变质谱中离子化高压电场的分布。血样中几乎所有的内源性物资如蛋白、脂肪、多糖和多肽都会增加LC/MS/MS的流动相粘度，改变喷雾溶液的表面张力，使得喷雾分散差，形成的液粒大，不能充分去溶剂，因而降低质谱喷雾离子源的喷雾效率，最终降低离子化效率，而血样中的磷酸酯和电解质则具备吸电荷或高导电性能，严重影响离子源的高压电场分布，这些物质的存在相当于和待测物竞争电荷，使得待测物难以带上电荷，从而降低离子化效率，尽管LC/MS/MS具备将这些基质效应物质与待测物分离的功能，但是血样中的很多内源物质在LC/MS/MS常用的色谱柱上表现怪异，常常并不出峰，而是慢慢通过色谱柱，缓缓流出，遍布整个色谱过程，因而始终导致基质效应。

消除LC/MS/SM检测中的基质效应是这个领域中的一个重大课题，市面上已经有各种各样以此为目的的固相萃取柱，其中用离子交换填料装柱的固相萃取柱见诸专利CN101549217A，但是，且不论这类产品除去基质效应的效果如何，仅建立这类产品的使用方法就要花费很多时间，一般都需要筛选活化、冲洗和洗脱等溶液，而且得到的萃取液通常量太大或不与LC/MS/MS系统兼容，还得蒸干重新溶解才能用于分析检测，操作步骤复杂，每个萃取柱的价格也相对较高，一般每个在￥10以上。