[发明专利]一种树突状细胞的制备方法及应用

说明书

本发明提供了一种树突状细胞的制备方法，属于肿瘤治疗技术领域；所述制备方法包括以下步骤：1)将人类白细胞抗原(HLA)和KRAS突变的融合基因连接到pCDH或哺乳动物表达载体，得到重组质粒；2)利用重组质粒电击转化外周血来源的树突状细胞(DC)，得到重组细胞(i‑DC)；3)诱导重组细胞成熟，得到成熟的树突状细胞。现有技术一般通过突变多肽负载抗原提呈细胞，或者将突变抗原转入抗原提呈细胞，但两者提呈的效率均较低，本发明通过构建KRAS抗原和HLA的融合基因，共同转入抗原提呈细胞，过表达两种基因，增加HLA与KRAS突变抗原的结合率，提高提呈效率，更容易得到特异性杀伤效果明显的CTL。

技术领域

本发明涉及肿瘤治疗技术领域，尤其涉及一种树突状细胞的制备方法及应用。

背景技术

ras基因家族与人类肿瘤相关的基因有三种：HRAS、KRAS突变和NRAS，分别定位在11、12和1号染色体上。KRAS突变因编码21kD的ras蛋白又名p21基因。在ras基因中，KRAS突变对人类癌症影响最大，当KRAS突变正常时能控制调控细胞生长的路径；发生异常时，则导致细胞持续生长，并阻止细胞自我毁灭。它参与细胞内的信号传递，当KRAS突变基因突变时，该基因永久活化，不能产生正常的ras蛋白，使细胞内信号传导紊乱，细胞增殖失控而癌变。

在实体瘤患者中，KRAS突变，是对靶向药抗药的原因之一。因此，KRAS突变患者很难从靶向药中获益，生存期短，因此，迫切需要开发针对KRAS突变的免疫细胞治疗手段；传统的靶向KRAS突变的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的制备，一方面受患者树突状细胞(DC)提呈能力弱的影响，另一方面，受患者人类白细胞抗原(HLA)缺失的影响，导致制备的CTL对KRAS突变的肿瘤细胞没有杀伤能力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种树突状细胞的制备方法及应用，该方法制备得到的树突状细胞能够提高提呈KRAS突变抗原的效率。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种树突状细胞的制备方法，包括以下步骤：

1)将人类白细胞抗原和KRAS突变的融合基因连接到pCDH或哺乳动物表达载体，得到重组质粒；

2)利用步骤1)所述重组质粒电击转化外周血来源的DC，得到重组细胞；

3)诱导步骤2)所述重组细胞成熟，得到成熟的树突状细胞。