[发明专利]一种检测2;5-二甲基吡嗪的方法

说明书

本发明公开了一种检测2,5‑二甲基吡嗪的方法，属于检测技术领域。本发明利用UPLC定量检测2,5‑DMP，实现了2,5‑DMP高效的生物检测。本发明实现mg级别到g级别的检测范围，并且样品处理方法简单，检测时间短，只需10min，可以高效的实现发酵样品中2,5‑DMP的检测。

技术领域

本发明涉及一种检测2,5-二甲基吡嗪的方法，属于检测技术领域。

背景技术

烷基吡嗪是一类支链带有烷基基团的含氮杂环化合物，作为重要的风味物质，主要贡献食品中的坚果味，烤肉味和烤面包味。烷基吡嗪具有极低的阈值，发酵的大豆中四甲基吡嗪 (2,3,5,6-Tetramethylpyrazine,TTMP)的阈值为10ppm，2,5-二甲基吡嗪(2,5-Dimethylpyrazine, 2,5-DMP)在食品中只添加1-2ppm，就可以起到明显的增香作用。由于阈值低，烷基吡嗪可以显示出强烈的气味特性，是我国GB2760-86规定允许使用的香精物质，在食品工业中主要用作调味的食品添加剂和一些香料中间体。

烷基吡嗪除了具有独特的风味价值之外，在医药方面也具有重要价值，可用作药物或医药中间体。TTMP被发现可以作为药物治疗一些疾病，例如中风、心肌细胞损伤、膝骨关节炎等。另外，TTMP还可以作为其他生物药物的前体来源，例如，4-(2,3,5,6-TTMP-1)-4'-去甲表鬼臼是一种具有较强抗肿瘤活性的新型化合物，TTMP-2'O-阿魏酸钠可以提供神经保护，防止神经炎症和脑损伤。2,5-DMP可以作为抗菌类药物5-甲基吡嗪-2-羧酸的重要合成原料。

目前检测2,5-DMP的方法主要采用GC-MS，即参照已授权专利：一种测定白酒中吡嗪类化合物的方法(申请号：CN200710019764.5)。然而，1.一台带有自动进样器的GC-MS售价在百万以上，难以应用于普通检测机构；2.GC-MS的检测幅度过窄，一般只能检测mM级别的吡嗪化合物。

发明内容

为了解决上述至少一个问题，本发明提供了一种检测2,5-二甲基吡嗪(2,5-DMP)的方法，通过利用UPLC定量检测2,5-DMP，实现了mg级别到g级别的检测范围，样品处理方法简单，检测时间短，只需10min。

本发明的检测2,5-二甲基吡嗪的方法，是利用UPLC进行检测；所述UPLC进行检测条件是：

色谱柱为WatersBEHC18；

流动相A为0.1％甲酸溶液、流动相B为色谱级甲醇；

流动相洗脱梯度：初始，31％B；0-3min，31％-69％B；3-10min，31％B；

运行时间为10min；

流速为0.20ml·min^-1；

紫外检测波长为275nm。

在一种实施方式中，UPLC进行检测的上样量1μL。

在一种实施方式中，所述检测为定量检测或定性检测。

在一种实施方式中，所述定量检测，是先配制2,5-DMP标准品，采用所述UPLC进行检测，根据2,5-DMP浓度与峰面积的变化拟合得到2,5-DMP标准曲线；然后将待测样品采用所述UPLC进行检测，将待测样品的峰面积代入2,5-DMP标准曲线中，即得到待测样品中的2,5-DMP浓度。

在一种实施方式中，所述待测样品为2,5-DMP水溶液，或者含有2,5-DMP的发酵上清液。

在一种实施方式中，所述发酵上清液，是将产2,5-DMP的微生物进行发酵培养后，将菌液离心获取的上清液。

在一种实施方式中，所述发酵上清液，是将B.subtilis168种子液接种至含有L-苏氨酸的培养基中发酵培养后获得的。