[发明专利]一种竹荪孢子中活性成分连续制备工艺

说明书

本发明公开了一种竹荪孢子中活性成分连续制备工艺。在多糖提取工艺的基础上进行优化，将除蛋白环节设计为第一步提取获得蛋白；脱脂环节设计为利用醇沉后回收的乙醇再次提取；同时针对醇沉这个步骤中，乙醇除了可以沉淀多糖，还会萃取溶液中的小分子类活性物质，因此对乙醇相进行进一步的分离提取获得不同种类的活性成分。本发明设计的一套提取工艺路线，可以对竹荪孢子连续提取，依次可以获得多肽、多糖、小分子活性物质等多个有价值的成分，达到充分利用竹荪孢子的目的。

技术领域

本发明属于农业加工领域，具体涉及一种竹荪孢子精深加工方法。

背景技术

竹荪是一种大型名贵的食用菌，被历代医药学家誉为“菌中皇后”，具有提高人体免疫力的功能。相关研究表明竹荪含有丰富的氨基酸，其中包括人体必须的8种氨基酸及13种非必需氨基酸，是食用菌中含氨基酸种类最多的一种。此外，竹荪中的有效成分，如竹荪三萜、竹荪多糖，有降低血压和体内胆固醇的作用，在抗肿瘤、抗凝血、抗炎症、降血糖方面都有一定的疗效。竹荪孢子粘附于竹荪菌盖上，就整个竹荪子实体而言，竹荪孢子占干重的9 ~ 13 %，相当于每生产3 kg的商品干竹荪就会产生1 kg的干竹荪孢子。根据相关报道，竹荪孢子含有丰富的不饱和脂肪酸和维生素等营养成分，且相关研究发现其有机溶剂提取物具有非常好的抗氧化和抗菌作用。但是，在竹荪的采摘过程中，竹荪孢子一般都是和菌盖一起被直接废弃掉，造成巨大的资源浪费；同时引起环境污染，造成连作障碍。因此，本发明提供一种竹荪孢子的精深加工工艺方法，以提取孢子多糖为主要路线，能够连续提取获得竹荪孢子多肽、竹荪孢子多糖、黄酮三萜等活性物质。

发明内容

本发明的目的在于一种竹荪孢子多糖、多肽、黄酮等活性成分连续制备工艺。几乎所有多糖提取工艺均有脱脂、提取、醇沉、除蛋白这4个关键环节，但多糖提取工艺中，提取目标仅为多糖，除掉的蛋白及醇沉过后乙醇相中的成分均未获得利用。本发明发现竹荪孢子除含有活性多糖外，还含有大量的蛋白，其有机溶剂提取物具有较强的抗氧化活性。因此本发明设计一套提取工艺路线，可以对竹荪孢子连续提取，依次可以获得多肽、多糖、小分子活性物质等多个有价值的成分，达到充分利用竹荪孢子的目的。

为实现上述目的，本发明采用如下技术路线：

一种竹荪孢子中活性成分连续制备工艺，以竹荪孢子多糖为主要工艺路线，将一般多糖提取过程去脂、除蛋白环节设计为黄酮等活性成分提取及多肽等营养成分收集。

具体包括以下步骤：

（1）将竹荪孢子水洗，喷雾干燥后，采用超微粉碎至粒径为1000~100纳米，将破壁竹荪孢子粉加入软水后，调节pH 7-9，超声提取，超声功率300-1000W，提取温度50-70℃，超声时间20-90min，然后3000r/min离心，获得上清液为竹荪孢子多糖蛋白溶液，沉淀为孢子残渣低温保存另用；

（2）竹荪孢子多糖蛋白溶液加入低浓度盐酸，调整pH至4.3，搅拌后静置使蛋白沉淀，5000r/min离心，上清液为竹荪孢子多糖溶液，沉淀即为竹荪孢子蛋白，按此方法竹荪孢子蛋白得率为38%-55%；

（3）将竹荪孢子蛋白加水溶解后，调节pH 7.5，加入竹荪孢子蛋白重量1.50%水解酶，保持温度45 ℃酶解4.0 h，酶解后获得蛋白分子量为5.8 ~ 30 kDa的竹荪孢子多肽；

（4）竹荪孢子多糖溶液加碱调节pH 7.5，60℃真空浓缩至原体积20%，加入4倍体积无水乙醇，充分搅拌后静置12h，5000r/min离心，沉淀即为竹荪孢子多糖，多糖得率为8%-11%，乙醇上清液备用；

（5）将步骤（4）的乙醇上清液45℃真空浓缩至原体积10%，获得浸膏Ⅰ，得率0.4-0.7%；

（6）回收步骤（5）乙醇，按30:1 ml/g加入步骤（1）的孢子残渣，超声提取，超声功率500W，45℃下提取60min，然后3000r/min离心，将乙醇上清液45℃真空浓缩至原体积10%，获得浸膏Ⅱ，得率2.1-3.4%；