[发明专利]一种构建感染动物模型的方法及应用

说明书

本申请公开了一种构建感染动物模型的方法及应用。所述方法包括将柯萨奇CVA4病毒株感染动物的步骤；所述柯萨奇CVA4病毒株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.17586，保藏日期为2019年4月25日，其滴度为10^8.6TCID₅₀/ml，其建立的稳定乳鼠感染模型，能够呈现与人类相似的病理变化，在此基础上本申请首次验证CVA4全病毒灭活疫苗的免疫原性，并发现IFN‑α2a和毒株YT226R疫苗的抗血清在体内外具有理想的抗CVA4效果，其建立的CVA4动物模型在研究HFMD的发病机制、评价疫苗的有效性及抗病毒药物的筛选等方面具有十分重要的作用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体说是一种构建感染动物模型的方法及应用。

背景技术

柯萨奇CVA4病毒(coxsackievirus A4，CVA4)属于小RNA病毒科肠道病毒A组成员，主要引起儿童疱疹性咽峡炎，也可引起手足口病HFMD。2009之前，引起HFMD的病原体主要是肠道病毒71型(EVA71)和CVA16，近几年在人群中其它型肠道病毒，比如CVA4、CVA6和CVA10感染率越来越高，并且出现CVA4与其它肠道病毒混合感染和基因重组事件，给临床诊断造成很大困难。尽管肠道病毒的感染通常是温和性、无症状的，但它们的传染性极高，临床症状多样，范围可从皮肤和粘膜出现疱疹的轻微症状，到引起无菌性脑膜炎、心肌炎和急性迟缓性麻痹等严重症状，因此，CVA4的感染对儿童身心健康造成极大危害，所涉及的公共卫生安全问题日益受到关注。

目前，临床治疗HFMD没有特效药物，主要采用广谱抗病毒药物利巴韦林和糖皮质激素对症治疗，但很难避免这些药物对人体先天免疫功能的损害和导致机体造血系统紊乱，接种疫苗是预防肠道病毒感染的最佳途径。CVA4的抗病毒研究尚处在起步阶段，关于CVA4动物模型的建立和灭活疫苗免疫原性的研究未见报道。

随着EVA71全病毒灭活疫苗在中国5岁以下儿童中推广接种，该疫苗有效免疫保护力可持续五年以上，可预见未来几年内HFMD的病毒谱必将发生改变，其它型肠道病毒感染率会逐渐上升，因此亟需研究CVA4的感染机制和开发抗病毒感染的药物和疫苗。

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种构建感染动物模型的方法及应用。

本发明所提供的构建感染动物模型的方法，包括将柯萨奇CVA4病毒株感染动物的步骤；所述柯萨奇CVA4病毒株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.17586，分类命名为柯萨奇病毒(Coxsackievirus)A组4型，病毒株编号为CVA4/YT226R/Shandong/China/2015，保藏日期为2019年4月25日。

在上述方法中，所述病毒株的感染剂量为10^2.6-10^0.6TCID₅₀，优选为10^2.0-10^1.0TCID₅₀，更优选为10^1.6TCID₅₀。

在上述方法中，所述病毒株感染的接种部位为肌肉、腹腔和/或颅脑，优选为肌肉；所述接种的方式优选为注射。

在上述方法中，所述感染时所述动物的日龄为1-9日龄，优选为3-7日龄，更优选为3日龄。

在上述方法中，所述动物为哺乳动物。

在上述方法中，所述哺乳动物为大鼠或小鼠，优选为小鼠。

在上述方法中，所述感染前，还包括对所述病毒株进行培养的步骤；

优选的，所述培养为将所述病毒株在细胞株中进行培养。