[发明专利]一种4,4,1-双环甾类化合物及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种4，4，1-双环甾类化合物，其特征在于该4，4，1-双环甾类化合物的结构式如(I)所示；

2.一种权利要求1所述的4，4，1-双环甾类化合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)发酵生产

将保藏号为CCTCC NO：M2014086的焦曲霉(Aspergillus ustus)在含有固体PDA培养基的平板上划线复活，置于28℃培养箱中培养5d；在平板上挑取一个单菌落接种到液体PDA培养基中，然后置于温度25℃，转速180rpm/min下，摇床培养2d后收集为种子液，然后将种子液按体积百分数10％的接种量接种到大米培养基中，置于温度28℃，转速150rpm/min下，摇床培养14d，获得发酵物，其中所述的大米培养基的配制方法如下：将80g大米和35g海盐溶于120mL海水中配制而成；

(2)浸膏提取

将上述发酵物加入甲醇中，超声破碎后放置过夜，共浸泡3次，而后对甲醇浸提液浓缩蒸干后，用水复溶，再用与复溶液等体积的乙酸乙酯重复萃取3次，合并三次萃取所得萃取液，将乙酸乙酯萃取液旋转蒸发至干后，获得粗浸膏；

(3)化合物的分离制备

将上述粗浸膏首先用体积比为1：1的二氯甲烷和甲醇混合溶剂溶解后，加200-300目硅胶拌样，采用体积比为1：5的石油醚/乙酸乙酯为洗脱剂，进行VLC减压柱层析，收集洗脱组分；再采用体积比为1：1的二氯甲烷/甲醇为洗脱剂对收集的组分进行LH-20凝胶柱层析，收集洗脱组分；然后采用甲醇和水为洗脱剂，对收集的组分进行中压柱层析；最后将收集的洗脱液经过半制备反相高效液相色谱对化合物进行分离纯化，洗脱剂为乙腈与水按体积比31:69的比例混合而成，其结构如(I)所示：其中所述的中压柱层析中梯度洗脱剂为甲醇和水，甲醇从20～80％，洗脱时间150min，所述的半制备反相高效液相色谱的化合物分离制备的流速为2.0mL/min。

3.一种权利要求1所述的4，4，1-双环甾类化合物的用途，其特征在于所述的4，4，1-双环甾类化合物在制备水产动物致病菌哈维弧菌抑制剂方面的用途。