[发明专利]用于抑制EIF4G1表达的USP10模拟多肽的制备方法

说明书

一种用于抑制EIF4G1表达的USP10模拟多肽的制备方法，以200个氨基酸残基为缺失单位，构建USP10缺失突变表达载体；在非小细胞肺癌细胞株中过表达筛选到的不能与EIF4G1结合的USP10缺失突变表达载体；检测以上缺失突变是否影响EIF4G1的表达；在上面筛选出的关键区域内，缩短缺失突变片段长度，确定结合关键残基所在区域；检测EIF4G1的表达水平，缩小影响USP10分子中与EIF4G1结合的关键区域；重复以上步骤，将结合区域缩短；进行关键残基的定点突变，用丙氨酸替换可能的关键残基构建定点突变表达载体，最终确定SP10分子中与EIF4G1结合的关键残基。

技术领域：

本发明属于生物工程领域，涉及一种多肽的制备方法，具体来说是一种用于抑制EIF4G1表达的USP10模拟多肽的制备方法。

背景技术：

据统计，肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤首位。肺癌可分为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)两大类，其中非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌病例的80％～85％。其中只有15-25％的非小细胞肺癌有手术治疗的机会，而即使接受根治性手术治疗，仍然有50％的NSCLC患者会复发。现在传统的治疗手段(手术及放化疗)在提高非小细胞肺癌的五年生存率方面遇到了瓶颈，而随着近几年转化医学的研究推进，研究了一些肿瘤检测方法和靶点，开发出了一些靶向性药物，但由于对NSCLC的疾病机制还不清楚，临床上仍然缺乏有效的早期检测指标和治疗靶点。因此，针对非小细胞肺癌的早期诊断指标和治疗靶点的转化医学基础研究具有重要意义。

真核细胞的蛋白质翻译起始是一个被高度调控的过程，在细胞增殖、分化、存活、维持动态平衡中发挥重要作用。肿瘤恶性表型通常与蛋白质合成失调关系密切，蛋白质翻译起始的调控成为当前肿瘤生物学研究的一个热点。真核翻译起始因子4γ(eukaryotictranslation initiation factor4gamma，EIF4G)是启动蛋白质合成的关键组分，该因子有三个亚型：EIF4G1、EIF4G2和p97/NAT1/DAP-5。EIF4G1作为EIF4G的一个重要亚型，最早发现是作为真核蛋白质翻译起始因子复合物EIF4F的组成蛋白之一。该复合物最重要的功能是将mRNA募集到核糖体上，这是蛋白质合成的起始步骤，也是限速步骤。在蛋白质翻译这一生理过程中，EIF4G1作为一个支架蛋白，介导EIF4A、EIF4E等翻译起始因子及其他参与起始的因子的结合从而调控蛋白的合成。

近年来越来越多的研究表明，EIF4G1的异常表达与肿瘤的发生、进展密切相关。有研究报道，EIF4G1可调控多个目的癌基因的表达，比如SMAD5、ERα、HIF1α、c-Myc等，在EIF4G1表达降低或活性受到抑制时，这些癌基因的表达也会同步下降。在多发性骨髓瘤细胞中，VEGF可以通过Akt信号通路，上调EIF4G1的表达。通过抑制EIF4G1的活性，可以有效抑制多发性骨髓瘤细胞的生长过程，有望成为治疗多发性骨髓瘤的潜在靶点。另有研究表明，乳腺癌细胞在电离辐射(IR)诱导的DNA损伤应答(DDR)过程中，通过表达高水平的翻译起始因子EIF4G1，介导协调选择性mRNA翻译，促进了细胞的生长和增殖。有报导显示EIF4G1位于染色体3q27上，该区域在50％的肺癌中被检测到有非正常的扩增，基因表达检测显示EIF4G1在非小细胞肺癌组织中过量表达。Tu等通过研究132例鼻咽癌(NPC)患者的临床组织切片发现，EIF4G1蛋白的表达水平与肿瘤T分级、淋巴结转移和临床分期呈正相关。通过研究107例NPC患者手术后的生存时间与EIF4G1水平之间关系发现，NPC患者的预后总生存期与EIF4G1水平密切相关；相比于EIF4G1表达较低的患者，EIF4G1高表达的患者总生存时间显著缩短；单因素分析结果显示，淋巴结受累、临床分期以及EIF4G1表达都是影响NPC患者总生存率的危险因素；Cox比例风险模型分析结果显示，EIF4G1的高表达能作为预测NPC病人总生存期的一项重要指标。但是至今为止，没有研究显示NSCLC中过量表达的EIF4G1与NSCLC组织学分级、分期及预后的相关性的研究报道。