[发明专利]一种微生物高灵敏检测培养基及其制备方法和应用

说明书

本发明属于微生物检测的技术领域，尤其涉及一种微生物高灵敏检测培养基及其制备方法和应用。本发明提供了一种微生物高灵敏检测培养基，包括胰酪大豆胨液体培养基和胎牛血清。本申请的微生物高灵敏检测培养基的制备方法十分简单，还具有成本低廉的优点。本发明能快速、高灵敏检查细胞制品是否受到微生物污染，解决了现有技术仍缺少此类产品的技术缺陷。

技术领域

本发明属于微生物检测的技术领域，尤其涉及一种微生物高灵敏检测培养基及其制备方法和应用。

背景技术

细胞培养是一切生物实验的开始，也是生物技术的基础，因此，在进行生物实验时要保证培养的细胞是无菌的、清洁的。培养的细胞如果受到微生物的污染，会在污染的后期才能发现。如果是真菌感染，在感染后期，能在低倍镜下可以看到小黑点；细胞受到污染，其生长会发生异常，高倍镜下可以分辨，这时也是培养的后期了。如果细胞受到的污染，如枯草杆菌、大肠杆菌、假单孢菌、白色葡萄球菌的污染，在培养的后期，细胞液会变混浊，pH改变。

中国药典2015版无菌检查法中规定使用硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基(TSA)进行无菌检查，其中，硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。然而无菌检查法主要指检查药品、敷料、缝合线、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其他品种是否无菌的一种方法，并非针对于细胞污染的检测方法。

然而，当前还没有一种针对干细胞的能快速、高灵敏检查细胞制品是否受到微生物污染的产品。

综上所述，研发一种能快速、高灵敏检查细胞培养过程是否受到污染的产品是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种微生物高灵敏检测培养基，能解决当前缺少一种快速、高灵敏检查细胞培养过程中，以及细胞制品是否受到微生物污染的产品的技术缺陷。

本发明提供了一种微生物高灵敏检测培养基，包括：胰酪大豆胨液体培养基和胎牛血清。

作为优选，所述胰酪大豆胨液体培养基和所述胎牛血清的质量比为(100-400):1。

作为优选，所述胰酪大豆胨液体培养基包括：胰酪胨、氯化钠、大豆木瓜蛋白酶消化物、葡萄糖、磷酸氢二钾和水。

作为优选，所述胰酪大豆胨液体培养基中各成分的用量为胰酪胨14-20g/L、氯化钠4.0-6.0g/L、大豆木瓜蛋白酶消化物2.4-3.6g/、葡萄糖2.0-3.0g/L、磷酸氢二钾2.0-3.0g/L和水。

作为优选，所述胰酪大豆胨液体培养基的水为余量。

作为优选，每一升所述胰酪大豆胨液体培养基，所述胎牛血清的添加量为2.5-10.0g。

进一步的，本发明公开的一种微生物高灵敏检测培养基的制备方法，包括以下步骤：

1)将胰酪胨、氯化钠、大豆木瓜蛋白酶消化物、磷酸氢二钾和水混合后，得到混合物；

2)将葡萄糖和胎牛血清加入所述混合物中，制备得到微生物检测培养基。

作为优选，所述步骤1)还包括：将胰酪胨、氯化钠、大豆木瓜蛋白酶消化物、磷酸氢二钾和水混合后，得到混合物依次进行过滤、pH值调节和灭菌处理。

作为优选，所述步骤1)的pH值调节至7.0±0.2。

作为优选，所述步骤2)还包括：将葡萄糖加入混合物中进行pH值调节和灭菌处理，然后添加胎牛血清，制备得到微生物检测培养基。

作为优选，所述步骤2)的pH值调节至7.0±0.2。

进一步的，所述灭菌处理具体为：煮沸灭菌、过滤灭菌、微波灭菌、射线灭菌或高压灭菌。