[发明专利]一种抗酸化虫黄藻的培育方法

说明书

本发明申请属于藻类培养技术领域，具体公开了一种抗酸化虫黄藻的培育方法，具体包括以下步骤,(1)接种：从珊瑚的共生膜中将健康的虫黄藻剥离下来，接种在光合生物反应器组内；(2)培养：将步骤(1)中接种到光合生化反应器组中的健康虫黄藻接进行单独培养；(3)定向进化；(4)重复上诉步骤，最终培育出适应低pH值的虫黄藻。本方法利用定向进化的方法对虫黄藻进行改造，适应了低培养液pH值的虫黄藻细胞。

技术领域

本发明属于藻类培养技术领域，具体公开了一种抗酸化虫黄藻的培育方法。

背景技术

随着全球平均气温的升高及海水中CO2溶解度加大，海水表层温度增加，酸化加剧，严重影响了海洋生态环境。珊瑚对热带海洋环境中的理化因素特别敏感，即使很小的变化也可能导致共生体系的破坏。已有大量研究表明，温度的升高和高强度的光辐射以及海水酸化是引起珊瑚白化的主要原因，当环境因素的变化超过了珊瑚的耐受范围，共生藻的光合器官受到损伤，导致光合作用下降。不同珊瑚对于环境应激的耐受程度不同，这与珊瑚体内共生的虫黄藻种类及密度有重要的关系。由于海洋吸收、释放大气中过量二氧化碳，海水正在逐渐变酸，导致大量珊瑚消失，这种变迁对海洋生态系统和依靠珊瑚礁旅游的海洋经济构成灾难性后果。本技术发明目的是培养耐受海水酸化的虫黄藻突变体，以重构珊瑚和虫黄藻的共生关系。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗酸化虫黄藻的培育方法。

为了达到上述目的，本发明的基础方案为：

一种抗酸化虫黄藻的培育方法，具体包括以下步骤,

(1)接种：从珊瑚的共生膜中将健康的虫黄藻剥离下来，接种在光合生物反应器组内；

(2)培养：将步骤(1)中接种到光合生化反应器组中的健康虫黄藻接进行单独培养；

(3)定向进化：虫黄藻进入对数生长期，虫黄藻的最适酸碱度pH～7.8；对培养处于对数生长期的虫黄藻耐热突变株的光合生物反应器以每天pH下调0.3的速率添加常用酸；到达pH＝5时，离心分离虫黄藻细胞，倒掉上清液，使用新鲜f/2人工海水培养液培养；

(4)重复上诉步骤，最终培育出适应低pH值的虫黄藻。

进一步，光合生物反应器组由一个摇床和内置6个150ML摇瓶组成，工作液位为50ML，虫黄藻由f/2人工海水培养液培养，摇床内置光源，光合生物反应器表面光强度为200Einstein/m-2/s；摇床初始温度调控在低于25℃，速度为80RPM。

进一步，步骤(4)时长4个月。

本方案的工作原理和有益效果：

本发明采用定向进化的方法，对一种虫黄藻进行改造，使其对高温和强酸的耐受性不断增强。从而使得珊瑚在撷取超级虫黄藻后构建的共生关系可以抵御海洋CO2的增加和海水酸化的加剧。

虫黄藻接种在光合生物反应器，由f/2人工海水培养液培养，反应器表面光强度约为200Einstein/m-2/s。初始温度调控在低于25℃，速度为80RPM。约5天后虫黄藻进入对数生长期，虫黄藻的最适酸碱度pH～7.8.对培养处于对数生长期的虫黄藻耐热突变株的光合生物反应器以每天pH下调0.3的速率添加常用酸，如盐酸，硫酸，醋酸和硝酸等。到达pH＝5时，离心分离虫黄藻细胞，倒掉上清液，使用新鲜f/2人工海水培养液培养。适应了低培养液pH值的虫黄藻细胞将会重新生成叶绿素，进而适应酸性环境生长。用4个月的时间反复进行上述pH缓降实验。虫黄藻细胞细胞的代谢机理会发生缓变，虫黄藻突变株将能适应培养环境的酸化。

具体实施方式

下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细的说明：

实施例

一种抗酸化虫黄藻的培育方法，具体包括以下步骤，