[发明专利]一种肿瘤细胞共培养三维模型及其构建方法和应用

说明书

本发明属于肿瘤细胞三维培养技术领域，尤其涉及一种肿瘤细胞共培养三维模型及其构建方法和应用。本发明采用海藻酸盐与钙盐进行交联制备微球作为细胞支架，提供细胞附着的锚点，能够为细胞提供良好的三维生长环境，并且，本发明将肿瘤细胞与成纤维细胞三维共培养，再通过Transwell装置将内皮细胞与混合细胞微球进行细胞共培养，构建三维共培养肿瘤‑血管体外模型，肿瘤细胞在三维共培养条件下加强了细胞‑细胞、细胞‑基质之间的相互作用，使肿瘤细胞具有更广阔的生长空间，能够更准确地模拟肿瘤细胞在体内的生存环境，使得构建的肿瘤细胞三维模型应用于抗肿瘤药物的筛选和/或评价更为准确、可靠，能够降低抗肿瘤药物研发的成本。

技术领域

本发明属于肿瘤细胞三维培养技术领域，尤其涉及一种肿瘤细胞共培养三维模型及其构建方法和应用。

背景技术

肿瘤模型对于抗癌药物研发至关重要，而传统二维细胞模型结构单一，细胞生长条件有限，细胞间相互作用微弱，肿瘤无法成团生长，不易转移或侵袭，难以准确模拟体内肿瘤的复杂环境，采用二维细胞模型所进行的药物评价和/或筛选是不准确的。

因此，构建一个能够更准确模拟人体肿瘤生长环境且经济高效的模型替代二维细胞模型，对于药物开发和评价筛选至关重要。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种肿瘤细胞共培养三维模型及其构建方法和应用，用于构建一个能够更准确模拟人体肿瘤生长环境且经济高效的模型。

本发明的具体技术方案如下：

一种肿瘤细胞共培养三维模型的构建方法，包括以下步骤：

a)将肿瘤细胞和成纤维细胞配制成混合细胞悬浮液，在所述混合细胞悬浮液中加入海藻酸盐溶液，得到混合细胞-海藻酸盐溶液；

b)将所述混合细胞-海藻酸盐溶液滴于钙盐溶液中，得到混合细胞微球；

c)将内皮细胞接种至Transwell装置上层小室后，将所述混合细胞微球接种至Transwell装置下层小室，进行细胞培养，得到肿瘤细胞共培养三维模型。

优选的，所述混合细胞悬浮液中所述肿瘤细胞和所述成纤维细胞的数量比例为(2～3)：(1～2)。

优选的，所述肿瘤细胞在所述混合细胞悬浮液中的浓度为1*10⁵个/ml～5*10⁶个/ml；

所述成纤维细胞在所述混合细胞悬浮液中的浓度为1*10⁵个/ml～5*10⁶个/ml。

优选的，所述肿瘤细胞选自前列腺癌细胞、乳腺癌细胞、子宫肌瘤细胞或肝癌细胞；

所述内皮细胞选自人脐静脉内皮细胞、静脉血管内皮细胞或动脉血管内皮细胞。

优选的，所述海藻酸盐为海藻酸钠；

所述钙盐选自氯化钙或硫酸钙。

优选的，所述海藻酸盐溶液的质量体积比浓度为2％～4％；

所述混合细胞悬浮液与所述海藻酸盐溶液的质量比为(1～3)：(1～3)。

优选的，所述钙盐溶液的浓度为0.1～0.2mol/L。

优选的，所述混合细胞微球的肿瘤细胞和成纤维细胞在Transwell装置的接种浓度分别为1*10⁵个/ml～5*10⁶个/ml和1*10⁵个/ml～5*10⁶个/ml。

本发明还提供了上述技术方案所述构建方法得到的肿瘤细胞共培养三维模型。