[发明专利]酿酒酵母钙通道膜蛋白Cch1p、Mid1p和Yvc1p抗原、抗体、制备方法和应用有效
| 申请号： | 201910468785.8 | 申请日： | 2019-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN110590947B | 公开（公告）日： | 2023-03-28 |
| 发明（设计）人： | 董晓宇 | 申请（专利权）人： | 大连大学 |
| 主分类号： | C07K16/14 | 分类号： | C07K16/14;C07K14/395;C07K1/22;C12N15/31 |
| 代理公司： | 大连智高专利事务所(特殊普通合伙) 21235 | 代理人： | 李楠 |
| 地址： | 116622 辽宁省*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 酿酒 酵母 通道 膜蛋白 cch1p mid1p yvc1p 抗原 抗体 制备 方法 应用 | ||
1.酿酒酵母钙通道膜蛋白Cch1p、Mid1p和Yvc1p单克隆抗体制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)确定适合做抗原片段的氨基酸序列SEDIDNO:1、SEDIDNO:2、SEDIDNO:3；根据氨基酸序列推导出基因序列CCH1-300、MID1-190、YVC1-236；
(2)利用原核表达系统对酿酒酵母的Cch1p-300、Mid1p-190和Yvc1p-236区域蛋白进行重组表达；
(3)利用Ni2+-NTA树脂亲和层析技术获得重组蛋白；
(4)将三种重组纯化蛋白Cch1p-300、Mid1p-190和Yvc1p-236分别免疫小鼠，并通过细胞融合技术制备单克隆抗体，经筛选、纯化，获得效价高的3株单克隆抗体；
所述的制备方法具体为：
S1.分别以酿酒酵母钙通道膜蛋白Cch1p、Mid1p和Yvc1p为抗原，免疫小鼠；
S2.取小鼠脾脏制备免疫脾细胞，将免疫脾细胞和SP2/0细胞混合于离心管中，使用聚乙二醇融合细胞得到杂交瘤细胞，将杂交瘤细胞进行小鼠腹腔注射生产腹水；
S3.取腹水过纯化柱得到洗脱液，将洗脱液再加入纯化柱进行二次纯化即为抗体；
步骤S1所述免疫小鼠的方法具体为：酿酒酵母钙通道膜蛋白Cch1p抗原免疫剂量25μg/只，每隔两周免疫一次，共四次，酿酒酵母钙通道膜蛋白Mid1p抗原初免剂量为100μg/只，之后每次免疫剂量为50μg/只，每隔两周免疫一次，细胞融合前3天将小鼠再冲击免疫一次，共四次，液泡膜钙通道膜蛋白Yvc1p抗原免疫初免剂量为100μg/只，之后每次免疫剂量为50μg/只，每隔两周免疫一次，共四次，细胞融合前3天将小鼠再冲击免疫一次；步骤S2所述免疫脾细胞和SP2/0细胞的比例为5:1；步骤S3为：取腹水过纯化柱得到洗脱液，将洗脱液再加入纯化柱并封闭纯化柱下端，使用装有中和液的离心管收集洗脱液即为单克隆抗体。
2.酿酒酵母钙通道膜蛋白Cch1p、Mid1p和Yvc1p抗原，其特征在于，
氨基酸序列分别为SEDIDNO:1、SEDIDNO:2、SEDIDNO:3。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于大连大学，未经大连大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910468785.8/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
