[发明专利]核盘菌SsBMR1基因及其在植物菌核病抗性育种中的应用

权利要求书

1.核盘菌SsBMR1基因，其编码氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的蛋白。

2.根据权利要求1所述的核盘菌SsBMR1基因，其特征在于，所述核盘菌SsBMR1基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.权利要求1所述核盘菌SsBMR1基因在构建沉默SsBMR1基因的寄主诱导表达沉默载体中的应用。

4.沉默SsBMR1基因的寄主诱导沉默表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：克隆SsBMR1基因的部分编码序列，将其正义序列和反义序列分别与SEQ ID No.3所示核苷酸序列的两端相连得到SsBMR1基因的RNAi结构，将所述RNAi结构接入植物表达载体的启动子和终止子之间得到所述寄主诱导沉默表达载体。

5.根据权利要求4所述构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下具体步骤：

(1)克隆SsBMR1基因的部分编码序列，将其正义序列和反义序列分别连入载体pCIT的内含子两端，构建沉默表达载体P-RNAi-hyg，所述正义序列、pCIT的内含子和反义序列连接形成的核苷酸片段为SsBMR1基因的RNAi结构；

(2)酶切沉默表达载体中的RNAi结构，将其连入植物表达载体的启动子和终止子之间，得到所述寄主诱导沉默表达载体R-HIGS。

6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述植物表达载体为pBinGlyRed3，其含有种子特异型的Glycinin启动子和Gly-term终止子的载体。优选的，所述SsBMR1基因的RNAi结构通过多克隆位点插入所述Glycinin启动子和所述Gly-term终止子之间，所述多克隆位点具体为EcoRI、XbaI、XmaI、SmaI和XhoI。

7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述植物表达中还含有卡那霉素(Kana)抗性元件，同时包含一个红色荧光蛋白(DsRed)的筛选标记，DsRed的启动子为CMV启动子，终止子为Nos终止子。

8.沉默SsBMR1基因的寄主诱导沉默表达载体，其特征在于，采用权利要求4-8任一项所述的构建方法构建。

9.权利要求1/2所述的核盘菌SsBMR1基因和权利要求8所述的寄主诱导沉默表达载体在植物菌核病抗性育种中的应用。优选的，所述植物菌核病抗性育种是指十字花科植物菌核病抗性育种。

10.权利要求8所述寄主诱导沉默表达载体在植物菌核病抗性育种中的应用方法，其特征在于，采用寄主诱导沉默表达载体转化农杆菌，农杆菌浸花法转化植物的花序得转化后的花序，将植物培养至种子成熟，利用基因标记挑选转化成功的植株。