[发明专利]玉米秸秆高效降解真菌的分离与鉴定方法

说明书

本发明公开了玉米秸秆降解真菌的分离与鉴定方法，选取样品，接种培养，菌种筛选培养，真菌筛选培养基、刚果红纤维素筛选琼脂培养、种子培养基和秸秆高效降解液态发酵培养基四个筛选培养基对多次活化得到的菌种进行筛选培养，纤维素降解真菌的初步筛选与生长形态观察，分子生物学鉴定，将形态学鉴定得到的各菌株进行PCR检测，对得到的结果建立系统发育树从而更加准确的鉴定出待测菌株。本发明用真菌筛选培养基筛选玉米秸秆高效降解真菌，用刚果红纤维素筛选琼脂培养基、种子培养基和秸秆高效降解液态发酵培养基进行筛选高效降解真菌。不同的筛选培养基进行培养，可以更加准确的得到需要的菌种，提高实验的准确性。纯化过程中通过严格的灭菌，使得鉴定结果更加的精准。

技术领域

本发明涉及生物降解领域，特别涉及玉米秸秆高效降解真菌的分离与鉴定方法。

背景技术

中国作为一个农业大国，其农作物秸秆资源量非常丰富，每年可收集的农作物秸秆资源量超过9亿吨，其中玉米秸秆占其总量的三分之一，现在农村耕地普遍存在着土壤肥力下降的现象，严重制约了现代农业的发展，秸秆还田是提高作物稻杆利用效率、提髙土壤肥力、改善土壤微环境的有效方法，当前蒙自对玉米秸秆的综合利用率仍然很低，不能实现玉米秸秆还田后的高效利用，大多数农户对玉米秸秆的处理方法仍是直接焚烧，不仅污染了环境，也使其不能发挥更好的作用。

当前大棚种植中土壤严重退化时只能弃棚，造成对土壤资源的破坏和经济上的损失。生物质基质栽培可以增加植物生物量和土壤微生物数量，能够克服连作障碍，其中农作物秸秆经高温腐熟后可作为生物质栽培基质，在把农作物秸秆转化为生物质栽培基质过程中，降解真菌起到了加速其腐烂的速度的作用，因此，要想更高效率的完成秸秆到栽培基质的转化，进一步了解并研究农作物秸秆高效降解真菌尤为必要，纯化培养最重要的是在于生理研究，方法是依靠灭菌和分离。在自然界中，有的培养条件很困难，特别是具有密切共生关系的生物及进行寄生性营养的生物，也有一些在理论上不可能进行纯粹培养的生物。微生物的分离鉴定整个过程中，操作的严谨性和精确性非常重要。尤其在纯化过程中由于灭菌不够彻底或者操作环境有杂菌而导致的污染，都能对试验结果致命的影响，进而使得鉴定结果不够精准。

发明内容

本发明的目的在于提供玉米秸秆高效降解真菌的分离与鉴定方法，以解决玉米秸秆基质化利用问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：玉米秸秆高效降解真菌的分离与鉴定方法，包括以下步骤：

S1：(1)选取样品，设五个不同的取样点,选取不同地区且不同腐解程度的玉米秸秆；(2)选取没有腐解迹象的秸秆，自然晾干，粉碎后过40目的筛，将过筛粉末放于自封袋保存，使用前灭菌并烘干；

S2：接种培养，对所得样品进行表面消毒，然后在超净工作台无菌条件下，将材料接种到PDA培养基，待微生物长出来后再进行多次培养活化；

S3：菌种筛选培养，真菌筛选培养基、刚果红纤维素筛选琼脂培养基、种子培养基和秸秆高效降解液态发酵培养基四个筛选培养基对多次活化得到的菌种进行筛选培养；

S4：纤维素降解真菌的初步筛选与生长形态观察；

S5：分子生物学鉴定，将形态学鉴定得到的各菌株进行PCR检测，对得到的结果建立系统发育树从而更加准确的鉴定出待测菌株。

优选的，将取得的材料用75％乙醇进行表面清洗与消毒1min，在超净工作台无菌条件下，分别接种到PDA培养基，在28℃条件下的恒温培养箱培养。

优选的，在进行菌种的生长习性和形态的观察时，需要对从玉米秸秆分离纯化微生物的整个过程进行记录，

优选的，在PDA培养基中加入阿莫西林和1％的孟加拉红水溶液。