[发明专利]一种脱除T-2毒素的枯草芽孢杆菌

说明书

本发明属于兽用微生物添加剂技术领域，具体涉及一种脱除T‑2毒素的枯草芽孢杆菌。T‑2毒素主要是三线镰刀菌产生的单端孢霉烯族化合物之一，主要污染小麦和玉米等粮食作物，对畜禽饲料也造成较大危害。本发明从保留菌株中筛选到一株对T‑2毒素脱毒型益生菌，即枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WXBs‑05，该菌株保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2019177。本发明对该菌株进行了生理生化和分类鉴定，对其生物学特性、脱毒特性、脱毒产物以及脱毒效果进行了验证。WXBs‑05菌株生长速度快，抗逆性和抑菌效果较强，可在脱除T‑2毒素的饲用微生物添加剂中应用。

技术领域

本发明属于兽用微生物添加剂技术领域，与抗生素添加剂领域有关，本发明涉及一种对T-2毒素具有脱毒效果的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株的筛选、鉴定、抑菌性能、抗逆性能、脱毒特性、脱毒物质及脱毒效果体内验证。

背景技术

T-2毒素主要是由三线镰刀菌产生的单端孢霉烯族化合物(trichothecenes，TS)之一广泛污染世界各地的大麦、小麦等谷物，当前农业生产中霉菌毒素污染严重，污染范围广，动物采食毒素污染的饲料后造成动物源性食品存在的毒素残留，会对人类的健康造成重大危害，因此T-2毒素带来的危害和影响已引起各国决策层及科学界的关注。常用的脱毒方法主要为物理脱毒法、化学脱毒法和生物脱毒法，由于生物脱毒法在霉菌毒素脱除过程中具有脱毒效率高、无毒副作用、无污染的独特优势，受到了全世界广泛的关注，因此寻找能够脱除饲料中T-2毒素的优良菌株并最终开发出脱毒剂具有重大意义，为发酵饲料中霉菌毒素的脱除提供技术支持，为畜牧业绿色、健康发展提供帮助。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的存在的技术问题，通过筛选得到一种对T-2毒素具有脱毒效果的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株。筛选出具有良好脱除T-2毒素并且可以作为饲料添加剂使用的益生菌菌株。本发明筛选出的益生菌菌株为一种对T-2毒素具有脱毒效果的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，本发明提供了枯草芽胞杆菌的筛选、鉴定、抑菌性能、抗逆性能、脱毒特性、脱毒物质的鉴定及脱毒效果的验证应用。

本发明的技术方案如下所述：

本发明以T-2毒素类似物苯基环氧乙烷和玉米浆作为唯一碳源和氮源，对实验室菌库中的微生物进行了初筛，利用T-2毒素纯品进行2次初筛，以两者结果结合筛选出7株在T-2毒素环境下存活的优良菌株。对这7株菌株做进一步复筛，以T-2毒素为底物，用竞争性ELISA法检测，最终筛选出脱毒率最高且最稳定的目的菌株WXBs-05。对所得的WXBs-05菌株进行了相关的生理生化和分类鉴定，将候选菌株WXBs-05鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。

申请人将所得的对T-2毒素具有脱毒效果的菌株命名为枯草芽孢杆菌WXBs-05，Bacillus subtilis WXBs-05，于2019年3月20日送交中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NO:M2019177。

枯草芽孢杆菌WXBs-05的菌学特征：

本发明的WXBs-05菌株在LB培养基上的生长特性见图1，其革兰氏染色特性见图2，其孔雀绿染色特性见图3。WXBs-05菌株在LB固体培养基上生长12h后菌落形态为圆形，白色微黄，边缘不整齐，菌落湿润。由革兰氏染色及孔雀绿染色结果可发现WXBs-05为革兰氏阳性菌，为长杆状，无荚膜，为中生或近中生型芽胞。

枯草芽孢杆菌WXBs-05的生长特性、抑菌能力及抗逆性研究表明，该菌株繁殖能力很强，无迟缓期，很快进入对数期，2h后进入稳定期，对大肠杆菌K88、O157、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌有一定的抑菌能力，耐高温、耐酸碱、耐胆盐、耐胃酸能力较强。