[发明专利]一种CD163突变体及其应用

说明书

本发明公开了一种CD163突变体及其应用，该CD163突变体是氨基酸序列第534位由谷氨酸E变为赖氨酸K。本发明通过不同种属CD163氨基酸序列比对，选取第534位氨基酸进行定点突变(谷氨酸E突变为赖氨酸K，即E534K)，构建真核表达载体系统；在猪肾PK‑15细胞中重组表达野生型(wild type，WT)和突变体CD163；以PRRSV经典毒株BJ‑4(GenBank编号AF331831)和HP‑PRRSV毒株HN07‑1(GenBank编号KX766378.1)感染细胞；通过荧光定量PCR、病毒滴度实验(半数细胞感染剂量，50％tissue culture infective dose，TCID₅₀)鉴定，第534位氨基酸突变对PRRSV感染宿主细胞具有显著的抑制作用，可应用于抗PRRSV猪培育、抗病毒疫苗和药物研发。

技术领域

本发明涉及一种CD163突变体及其应用，属于分子生物学、病毒学和细胞生物学领域。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)，俗称猪蓝耳病，是一种以妊娠母猪流产、死胎、弱胎和木乃伊胎等繁殖障碍以及各年龄段猪呼吸道症状为主要特征的高度接触性传染疫病。PRRS对我国养猪业危害巨大，是制约国内养猪业健康发展的传染病之一。尤其是2006年，我国大面积爆发和流行的以高热、高发病率和高死亡率为特征的高致病性PRRS(highly pathogenic PRRS，HP-PRRS)，对国内养猪业造成了前所未有的打击。PRRS病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS virus，PRRSV)，是一种具有囊膜的单股正链RNA病毒，属于套式病毒目(Nidovirales)动脉炎病毒科(Arteriviridae)动脉炎病毒属(Rodartevirus)。研究证实，PRRSV是由其必需受体CD163介导感染宿主细胞致病的。因此，阐明CD163在PRRSV感染中的具体作用机制，将为揭示PRRSV致病机理和临床防控奠定基础。虽然目前已有部分研究，但是CD163中参与PRRSV感染的重要氨基酸位点尚有待全面揭示。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供CD163在PRRSV感染宿主细胞过程中具有重要作用的第534位氨基酸及其应用。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种CD163突变体，其氨基酸序列第534位发生突变。

氨基酸序列是以猪源CD163氨基酸序列为标准，第534位氨基酸发生突变。

氨基酸突变是由谷氨酸E变为赖氨酸K。

一种CD163突变体在抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒结合、侵入、感染方面的应用。

一种CD163突变体在培育抗猪繁殖与呼吸综合征病毒猪方面的应用。

一种CD163突变体在制备抗猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗和药物中的应用。

本发明通过不同种属CD163氨基酸序列比对，选取第534位氨基酸进行定点突变(谷氨酸E突变为赖氨酸K，即E534K)，构建真核表达载体系统；在猪肾PK-15细胞中重组表达野生型(wild type，WT)和突变体CD163；以PRRSV经典毒株BJ-4(GenBank编号AF331831)和HP-PRRSV毒株HN07-1(GenBank编号KX766378.1)感染细胞；通过荧光定量PCR、病毒滴度实验(半数细胞感染剂量，50％tissue culture infective dose，TCID₅₀)鉴定，第534位氨基酸突变对PRRSV感染宿主细胞具有显著的抑制作用，可应用于抗PRRSV猪培育、抗病毒疫苗和药物研发。

本发明有益效果：