[发明专利]一种三联袋以及应用三联袋分离脐带血造血干细胞的方法

说明书

本发明建立一种三联袋以及应用三联袋分离脐带血造血干细胞的方法，本方法采用三联袋的方式从脐带血中分离出造血干细胞，三联袋分离的整个操作过程在封闭无菌的环境内完成，既可以减少操作过程的污染，同时对操作环境和人员的无菌要求低，便于操作；分离过程采用自动分浆夹去除血浆，速度快，操作简单，提高了操作效率。

技术领域

本发明涉及一种三联袋以及应用三联袋分离脐带血造血干细胞的方法，属于 脐带血造血干细胞的提取的技术领域。

背景技术

造血干细胞(hemopoietic stem cell)是指一群尚未发育成熟的细胞，是所有 造血细胞和免疫细胞的起源，它不仅可以分化为红细胞、白细胞和血小板，还可 以跨系统分化为各种组织器官的细胞，具有自我更新、多向分化和归巢(即定向 迁移至造血组织器官)的潜能，属于多能干细胞。研究发现造血干细胞可以治疗 多种疾病，随着医学的发展，造血干细胞移植目前已经成为根治白血病等血液系 统疾病的主要手段，为人类战胜疾病带来了新的希望。

脐带血是胎儿娩出后，残留在胎盘和脐带中的血液，通常是废弃不用的。但 近几十年的研究发现，脐带血中含有可以重建人体造血和免疫系统的造血干细胞， 而且数量较多。因此，脐带血已经成为造血干细胞的重要来源，特别是无血缘关 系的造血干细胞的来源，也是非常重要的人类生物资源。目前从脐带血中分离出 造血干细胞存在手工开放式操作污染概率高，环境要求高，操作复杂等问题；自 动分离系统具有简单方便，但分离成本高的缺点，因此寻找一种操作过程污染概 率低，环境要求低，操作简单，成本低的分离方法具有重要意义。

发明内容

本发明针对上述问题，从而提出了一种三联袋以及应用三联袋分离脐带血造 血干细胞的方法。

具体的技术方案如下：

一种三联袋，包括制备袋、血浆袋和冻存袋，其中，制备袋上分别设有第一 连接管、第四连接管和第五连接管；

第一连接管分别与第二管道和第三管道相连接，第一连接管上设有第一取样 口，第二连接管与输血穿刺器相连接，第三连接管与血浆袋相连接，第三连接管 上设有第二取样口；

第四连接管与冻存袋相连接；

第五连接管与加冻存液口相连接；

第二连接管上设有第一夹子、第四连接管上设有第二夹子、第五连接管上设 有第三夹子、第三连接管上设有第四夹子。

应用上述的三联袋分离脐带血造血干细胞的方法，包括以下步骤：

1)将三联袋消毒后放入生物安全柜中，排净血浆袋和冻存袋中的空气，关 闭所有夹子；

2)将三联袋的输血穿刺器扎入采血袋的旋帽开口端并拧紧；

3)举起采血袋，松开第一夹子，使采血袋内血液流入制备袋内，转移完成 后关闭第一夹子，将制备袋放置在摇床上摇匀5min；

4)将准备好的羟乙基淀粉通过第一取样口注入制备袋后混匀；

5)用两个充气后的转移袋将装有脐带血的制备袋夹住固定于离心杯中，配 平后放置于离心机内离心50g，7min，10℃；

6)离心结束后，取出离心杯，再从离心杯中取出制备袋，用止血钳夹住第 一夹子附近管道，倒挂静置5min；

7)待分层清晰后，打开第一夹子，用止血钳控制红细胞流速，使红细胞以 3-10ml/min的速度流入采血袋中，直至分层界面距离制备袋管口1cm处，夹住 止血钳，关闭第一夹子，取下制备袋，热合掉连接采血袋的管道；

8)把制备袋中的血液混匀，用两个充气后的转移袋夹住制备袋固定到离心 杯中，配平后放置于离心机内离心747g，15min，10℃；