[发明专利]一种基于甲烷氧化菌素功能化纳米金的铜离子检测方法

权利要求书

1.一种基于甲烷氧化菌素功能化纳米金的铜离子检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）样品的预处理：向空白对照样品及待检测的样品中加入三氯乙酸，20min后以10000r/min的转速离心10min，取上清液，并向上清液中加NaOH至pH值为7，得到经过预处理的空白对照样品和待检测样品；

其中对照样为不含铜离子的空白对照；

（2）甲烷氧化菌素功能化纳米金的制备：取一定浓度的甲烷氧化菌素溶液，加入浓度为1×10^-4~1×10^-6mol/L氯金酸溶液，在一定温度的水浴条件下反应30~120min，得到甲烷氧化菌素功能化纳米金溶液；

（3）取步骤（1）中经过预处理的空白对照样和经过预处理的待检测样品分别加入至步骤（2）中制备好的甲烷氧化菌素功能化纳米金溶液中，然后将对照样和待检测样品在室温下放置5~20min；

（4）观察溶液的颜色变化并于对照样进行对比，若对照样品颜色无变化的同时待测样颜色变为蓝紫色，则证明待测液中含有铜离子。

2.根据权利要求1所述的基于甲烷氧化菌素功能化纳米金的铜离子检测方法，其特征在于，步骤（1）中三氯乙酸的加入量为待检测的样品体积的1/5。

3.根据权利要求1所述的基于甲烷氧化菌素功能化纳米金的铜离子检测方法，其特征在于，步骤（2）中甲烷氧化菌素与氯金酸的物质的量比为1:(1~10)， 甲烷氧化菌素溶液与氯金酸溶液的体积比为1:1。

4.根据权利要求1所述的基于甲烷氧化菌素功能化纳米金的铜离子检测方法，其特征在于，步骤（2）中水浴温度为30~80℃。

5.根据权利要求1所述的基于甲烷氧化菌素功能化纳米金的铜离子检测方法，其特征在于，步骤（3）中待检测样品体积为甲烷氧化菌素功能化纳米金溶液体积的1/100；对照样品体积为甲烷氧化菌素功能化纳米金溶液体积的1/100。

6.根据权利要求1所述的基于甲烷氧化菌素功能化纳米金的铜离子检测方法，其特征在于，步骤（2）中甲烷氧化菌素溶液所用甲烷氧化菌素由以下方法制备得到：将1L甲烷氧化细菌发酵液在4℃条件下使用高速冷冻离心机以8000r/min的速度离心20min；取离心后的上清液使用活化的Diaion HP-20大孔径树脂进行动态吸附，分别用2倍柱体积的双蒸水除去未被吸附的杂质，再用60%甲醇洗脱吸附的甲烷氧化菌素，洗脱液经旋转蒸发除去甲醇后经真空冷冻干燥得白色粉末，即得甲烷氧化菌素。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的基于甲烷氧化菌素功能化纳米金的铜离子检测方法，其特征在于，将步骤（4）中的步骤替换为：放置结束后使用紫外分光光度计进行400~700nm的波长扫描，若待检测样品与对照样品在波长为500~600nm的扫描图不能完全重合并且出现的吸收峰小于对照样品，则证明待测液中含有铜离子。

8.根据权利要求1-6中任一项所述的基于甲烷氧化菌素功能化纳米金的铜离子检测方法，其特征在于，将步骤（4）中的步骤替换为：放置结束后使用紫外分光光度计进行400~700nm的波长扫描，若待检测样品与对照样品在波长为600~700nm的扫描图出现的吸收峰大于对照样品并且出现新的吸收峰，则证明待测液中含有铜离子。

9.根据权利要求1-6中任一项所述的基于甲烷氧化菌素功能化纳米金的铜离子检测方法，其特征在于，将步骤（4）中的步骤替换为：放置结束后使用紫外分光光度计测定波长为520nm、654nm时的吸光度值，计算A₆₅₄/A₅₂₀的比值并与空白样品的比值进行比较，若两数值不同并且对照样品的比值大于待测样的比值，则证明待测液中含有铜离子。