[发明专利]一种胸腹水类器官培养基、培养方法及药敏测试方法

说明书

本发明公开了一种胸腹水类器官培养基、培养方法及药敏测试方法，本发明的培养基，可以有效的维持组织细胞特异性、干细胞特性、基因分型高度一致，组织形态也高度相似。除了满足科学研究的需要，在临床用药指导方面，体外类器官培养为患者的药物用药指导提供了很好的一个有益的选择。

技术领域

本发明涉及类器官培养领域，进一步涉及胸腹水类器官培养领域，特别是用于肿瘤患者术后胸腹水中残留癌组织或癌细胞3D培养的培养基、类器官培养方法及药敏测试方法。

背景技术

癌性胸腹水，也叫恶性胸腹腔积液，是中晚期癌症常见的并发症之一，也是部分患者的主要临床症状或体征，严重的胸、腹水甚至可危及生命。恶性胸水的疾病常见于肺癌、乳腺癌，其次为恶性淋巴瘤、卵巢癌、恶性胸膜间皮癌、食管癌、胃癌、贲门癌及病因不明的恶性肿瘤。

手术目前是多种肿瘤治疗的主要手段，而辅助治疗的作用就是消除微转移肿瘤沉积物，这种微转移沉积物可以增加癌症复发的机会。所以术后选择合适的药物进行辅助化疗，可以显著降低肿瘤的复发风险，提高患者的生存率。

现有的技术不能精确给出术后辅助指导用药的评价。对散落在胸腹腔积液的肿瘤沉积物或肿瘤细胞的培养主要是普通的二维培养技术。在二维培养条件下，癌细胞难以或不能充分表现出其来源癌组织的特性，使得培养的癌细胞与其来源癌组织对药物的反应有所差异，无法用于辅助用药指导。

虽然多种人源组织在不同的培养条件下可在体外成功培养成类器官，但是目前暂无关于癌性胸腹水类器官培养方法的研究及报道，尤其是具体的培养条件，即癌细胞收集保存方法，3D培养的培养基和进一步作为术后辅助指导用药的药敏筛查方案尚无尝试及报道，本发明专利配方价格适中，可操作性和重复性好。

发明内容

本发明目的在于提供一种用于癌性胸腹水类器官培养方法，包括培养基及类器官培养成功后的药敏敏感性测试方案。该方法可操作性和重复性好，所用培养基配方价格适中。

本发明采用的技术方案如下：

一种胸腹水类器官的培养基成分，培养基的成分及其含量如下：B27，40-60X稀释；N-acetylysteine，1-5mM；EGF，1-100ng/ml；Noggin，50-200ng/ml；R-spondin 1，200-1000ng/ml或10-50％(v/v)条件培养基；A83-01，200-1000nM；FGF10,50-200ng/ml；FGF2，10-50ng/ml；Nicotinamide，1-20mM；Y-27632，1-20μM；Prostaglandin E2，0.1-2μM；SB202190，1-20μM；Heparin，1-5μg/ml。

进一步地，培养基的成分及其含量如下：B27，50X稀释；N-acetylysteine，2.5mM；EGF，10ng/ml；Noggin，100ng/ml；R-spondin 1，500ng/ml或30％(v/v)条件培养基；A83-01，500nM；FGF10 100ng/ml，FGF2，25ng/ml；Nicotinamide，10mM；Y-27632，10μM；Prostaglandin E2，1μM；SB202190，10μM；Heparin，2.5μg/ml。

进一步地，胸腹水为肿瘤患者术后的胸腔或腹腔积液。

本发明还公开了一种癌性胸腹水类器官培养方法，具体步骤为：收取胸腹水，加入一定体积的保存液，摇床震荡，过滤细胞，离心，去除上清，加入DMEM/F12，离心，去除上清；细胞计数，加入胶液，滴于孔板孔正中，放置培养皿，凝固胶液；每孔加入培养基，细胞培养箱培养。