[发明专利]一种人源视网膜色素上皮细胞注射液中二甲基亚砜残留的测定方法

说明书

本发明公开了一种人源视网膜色素上皮细胞注射液中二甲基亚砜残留的测定方法，包括：(1)人源视网膜色素上皮细胞注射液前处理：注射液离心后取上清液进行检测；(2)取一定量上清液加入适量稀释液后混匀；(3)将混合液用气相色谱与质谱联用技术进行残留分析，寻找最优的色谱条件进行方法学验证；(4)使用验证通过的方法进行注射液中二甲基亚砜残留的测定。本发明提供了一种简单、快速有效、结果准确可靠，且为控制人源视网膜色素上皮细胞注射液中二甲基亚砜残留量提供切实可行的方法。

技术领域

本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种人源视网膜色素细胞注射液中二甲基亚砜残留测定的方法。

背景技术

视网膜色素上皮(RPE)是位于视网膜外部的连续单层细胞，因其筛子状的形态和胞质内丰富的黑色素而得名，它们在视网膜细胞的维持和自我更新上发挥重要功能，如：吞噬消化脱落的光感受器细胞的OS；促进视循环中重要的介质11-顺视黄醛的再生；调节眼内的免疫反应；参与形成视网膜-血管屏障等。RPE细胞的这一生理功能异常被认为与相关眼科疾病的发生密切相关，如RPE细胞屏障功能异常则易导致Best卵黄样黄斑营养不良(Bestvitelliform macular dystrophy，BVMD)和成人卵黄样黄斑营养不良(adult-onsetvitelliform macular dystrophy，AVMD)。RPE基底膜与Bruch＇s membrane之间的连接或功能异常被认为与年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration，AMD)和Sorsby’s眼底营养不良的发生相关。

AMD主要表现为视网膜色素上皮细胞对视细胞外节盘膜吞噬消化能力下降，结果使未被完全消化的盘膜残余小体潴留于基底部细胞原浆中，并向细胞外排除沉积于Bruch膜，形成玻璃膜疣。AMD分为干性和湿性两种，其中，干性AMD更为常见，它是由于RPE进行性营养不良造成的脉络膜毛细血管和光受体缺失的一种疾病。湿性AMD的典型特征是有脉络膜新生血管(choroidal neovascularization，CNV)生成，从而造成严重的视力丧失。除了细胞替代治疗，目前尚无逆转这一退行性过程并恢复视力的有效办法。

RPE细胞治疗AMD的试验显示通过在视网膜下腔移植正常RPE细胞，能够延缓进行性的视觉功能丧失。RPE细胞移植在RPE遗传缺陷动物模型和AMD患者上的试验，都显示能够延缓视网膜的退行性病变，改善视觉功能。RPE细胞在视网膜下腔的自体移植比较稳定，且具有长期的疗效。

药品中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂。人源视网膜色素上皮细胞注射液中二甲基亚砜，在ICH Q3C(R7)残留溶剂的指导原则中，归为第三类溶剂，属于对人体具有潜在毒性的溶剂。现有技术中采用多种不同分析方法实现对已知药物中有机溶剂的残留进行测定。如气相色谱法、液相色谱法以及质谱检测等方法。文献《毛细管气相色谱法测定加替沙星中二甲基亚砜残留量》(2008年第17卷第10期)，采用毛细管气相色谱法实现对加替沙星中二甲基亚砜的定量检测。文献《GC法测定棕榈哌泊嗪中残留溶剂二甲基亚砜》(2011年第14卷第12期)采用 GC法实现对棕榈哌泊嗪中二甲基亚砜的定量测定。然而上述两种方法在应用到实际生物样品中时，由于二甲基亚砜浓度低，存在内源性的干扰，且提供检测的样本量较少，导致上述方法运用到此类产品中时，其准确度、精密度和灵敏度等将无法达到法规要求。因此开发一种对实现人源视网膜色素上皮细胞注射液中二甲基亚砜残留的检测具有重要的意义。

发明内容

针对现有技术中存在的上述等问题，迫切需要研发一种能实现可简单快速、准确的对人源视网膜色素上皮细胞注射液中的二甲基亚砜(DMSO)残留进行检测分析的技术方案。现有技术中未有关于细胞类产品中二甲基亚砜残留的测定，化药中有少量文献报到了关于二甲基亚砜残留测定的技术，主要是用毛细管气相色谱法测定。本发明主要是涉及细胞产品，现有技术无法获得相同/相近的检测方法，加之残留限度较低，气相色谱的检测限无法满足其要求，故采用气相色谱与质谱联用的方法，进而摸索最佳的色谱条件进行检测。