[发明专利]一种猪丹毒SpaA蛋白及其在制备疫苗中的应用

说明书

本发明提供一种猪丹毒SpaA蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1。本发明的猪丹毒杆菌SpaA蛋白用于制备疫苗或诊断试剂。本发明的猪丹毒杆菌SpaA蛋白制备的亚单位疫苗具有抗原稳定性高，纯度高，特异性强，不产生其他不相关抗体，检测方法方便准确的特点，为工业化生产猪丹毒亚单位疫苗和诊断试剂奠定了坚实的基础。

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种猪丹毒SpaA蛋白及其在制备疫苗中的应用。

背景技术

猪丹毒(Swine erysipelas)是由猪丹毒杆菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)引起的一种人畜共患传染病，其临诊特征主要为高热、急性败血症、皮肤疹块、慢性疣状心内膜炎及皮肤坏死与多发性非化脓性关节炎。目前，该病在世界上大多数国家都有分布，呈散发或流行性发生，给养猪业造成了很大的经济损失，也给人体健康带来威胁。猪丹毒与猪瘟、猪肺疫并称为中国养猪业的三大传染病，造成严重的经济损失。

目前，免疫接种仍是预防猪丹毒最有效的方法，主要使用传统疫苗，即猪丹毒灭活菌苗和弱毒活菌苗。由于灭活过程可造成细菌抗原表位缺失或抗原性减弱，灭活苗不能产生足够的保护力；弱毒苗的效力很容易受母源抗体和抗生素的干扰，且弱毒菌株存在毒力返强以及诱导隐性感染的可能性。而且猪丹毒的隐性感染可能会发展成慢性型，现有的疫苗不能对慢性猪丹毒产生足够的保护力。因此，针对猪丹毒丝菌免疫保护性抗原研制亚单位疫苗，是猪丹毒新型亚疫苗研究的主要方向。

发明内容

本发明目的是提供一种猪丹毒SpaA蛋白以及使用SpaA蛋白制备的亚单位疫苗，从而弥补现有技术的不足。

本发明首先提供一种猪丹毒杆菌SpaA蛋白，包含有：

1)氨基酸序列为SEQ ID NO:1的蛋白；

2)在1)的蛋白上取代、缺失、添加一个或几个氨基酸，且具有1) 中蛋白功能的蛋白；

编码上述猪丹毒杆菌SpaA蛋白的基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:3；

本发明的猪丹毒杆菌SpaA蛋白用于制备疫苗或诊断试剂。

本发明再一个方面提供一种亚单位疫苗，是使用上述的SpaA蛋白作为抗原制备的。

本发明的猪丹毒杆菌SpaA蛋白制备的亚单位疫苗具有抗原稳定性高，纯度高，特异性强，不产生其他不相关抗体，检测方法方便准确的特点，为工业化生产猪丹毒亚单位疫苗和诊断试剂奠定了坚实的基础。

具体实施方式

本发明的目的是提供一种猪丹毒杆菌抗原蛋白(SpaA蛋白)，其在大肠杆菌中获得可溶性的表达，制备亚单位疫苗，从而弥补现有技术的不足，有利于相关疾病的防制。

下面结合具体实施例对本发明进行详细的说明。

实施例1：SpaA基因的扩增及序列分析

2019年湖北省某规模养猪场疑似发生猪丹毒，多头育肥猪出现急性病死情况，临床表现主要为发病突然，病猪体温升高达42℃，全身皮肤发红，尤以四肢内侧、胸腹部、颈部和耳部等处发红明显，且在四肢末端和腹下等处出现紫色斑块。经临床调查和实验室检测，初步诊断为发生猪丹毒。经调查，确信上述的养猪场之前已经免疫过猪丹毒灭活疫苗和弱毒活菌苗，并且中和抗体的检测确定免疫效果达到标准。因此怀疑有猪丹毒杆菌在疫苗的选择压力下发生了突变，无菌采集病死猪肺脏进行常规分离、鉴定，确定致病菌为猪丹毒杆菌。

1、扩增猪丹毒杆菌SpaA基因

根据NCBI中发表的猪丹毒杆菌SpaA基因序列，设计并合成了引物, 引物的序列信息如下：

primer1：5′-ATGAAAAAGAAAAAACACCTAT-3′；