[发明专利]一种鉴定山茶花色芽变品种的方法

说明书

本发明公开了一种鉴定山茶花色芽变品种的方法，利用高效液相色谱–光电二极管阵列检测和超高效液相色谱–四极杆–飞行时间质谱联用技术对山茶品种红色花瓣及其粉色与白色芽变品种花瓣中花青苷成分与含量进行研究，结合花色表型分析，对山茶花色芽变进行有效鉴定，明确山茶花色芽变与花青苷之间的关系，揭示山茶花色芽变形成的物质基础，从而为山茶花色芽变育种提供科学依据。

技术领域

本发明涉及一种利用花色及花瓣中花青苷成分与含量鉴定山茶花色芽变的方法，属于生物技术领域。

背景技术

山茶（Camellia japonica）品种冬春季节开花，观赏价值高、适应性强，是园林绿化及盆栽重要的木本花卉，在国内外广泛应用。山茶花色变异丰富，其原始花色为红色，通过芽变可产生粉色、白色及复色品种，如通过芽变已从山茶‘红芙蓉’、‘红嫦娥彩’和‘红五宝’等开红色花的品种中选育出相应的粉色和白色品种。植物花色色素主要包括类黄酮、类胡萝卜素和生物碱，山茶属植物花色色素成分主要为类黄酮，包括山茶红色花瓣中的花青苷类和金花茶（C. nitidissima）类黄色花瓣中的黄酮醇类等。研究山茶及其芽变品种不同花色花瓣中花青苷成分与含量，明确山茶花色芽变与花青苷关系对山茶花色的芽变育种具有重要意义。

到目前为止，山茶属花青苷研究主要集中于部分山茶物种及开红色花的品种上，山茶品种花瓣中花青苷成分与花色的关系及不同花色形成机制尚不清楚。山茶花色主要为红色，通过芽变极易形成粉色和白色变异品种。芽变选育为山茶育种重要方法，但目前关于山茶及其粉色、白色芽变品种花色芽变的物质基础尚不清楚，极大地限制了山茶花色的芽变育种。因此必须寻找一种高效便捷的鉴定山茶花色芽变品种的方法，明确山茶花色芽变与花青苷之间的关系，为山茶花色芽变育种提供科学依据。目前，关于芽变品种的鉴定主要应用分子标记技术，如苹果、梨等果树中应用ISSR或SSR等分子鉴定其芽变，关于利用花色及花瓣中花青苷成分与含量鉴定山茶花色芽变品种方面尚未见相关报道。

本发明利用高效液相色谱–光电二极管阵列检测和超高效液相色谱–四极杆–飞行时间质谱联用技术对山茶品种红色花瓣及其粉色与白色芽变品种花瓣中花青苷成分与含量进行研究，结合花色表型分析，对山茶花色芽变进行有效鉴定，明确山茶花色芽变与花青苷之间的关系，揭示山茶花色芽变形成的物质基础，为山茶花色芽变育种提供科学依据。

发明内容

本发明利用高效液相色谱–光电二极管阵列检测和超高效液相色谱–四极杆–飞行时间质谱联用技术对山茶品种红色花瓣及其粉色与白色芽变品种花瓣中花青苷成分与含量进行研究，结合花色表型分析，对山茶花色芽变进行有效鉴定，明确山茶花色芽变与花青苷之间的关系，揭示山茶花色芽变形成的物质基础，从而为山茶花色芽变育种提供科学依据。提出一种鉴定山茶花色芽变品种的方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种鉴定山茶花色芽变品种的方法，其特征在于：所述鉴定方法具体如下：

步骤1，花色测定：采集山茶品种测定花色的L*、色相a*值、色相b*值、彩度C*值和色调角h，花色测定位置为花瓣上表皮中央部位，光源为C/2°；每样品测量5朵花的花色，数据列表，取平均值；

步骤2，定性分析：取山茶品种新鲜花瓣0.6 g，液氮研磨至粉末加提取液2 mL，浸提24 h后用0.22 μm滤膜过滤，滤液保存在-20℃冰箱备用；