[发明专利]一种RFF2细胞的构建方法

权利要求书

1.一种RFF2细胞的构建方法，其特征在于，所述构建方法用于构建一种用于细胞免疫治疗的RFF2细胞，所述方法包括以下步骤：

S1)PBMC细胞负载致肿瘤突变的多肽，而后对负载多肽后的PBMC细胞进行一次多肽冲击；

其中，所述致肿瘤突变的多肽由以下方法合成得到：

对肿瘤细胞进行全外显子测序；

将全外显子测序结果与正常细胞的基因组相比，筛选出突变的氨基酸位点；

以突变的氨基酸位点为中心，向两侧延伸10个氨基酸，以一段21个氨基酸的多肽作为潜在抗原表位作为潜在抗原表位；

采用多肽固相合成法合成突变多肽；

S2)冲击后扩大培养，以得到FF细胞；

S3)以致肿瘤突变的多肽作为抗原直接刺激所述FF细胞以筛选精准多肽，其中，所述精准多肽评判标准为：以FF细胞作为基线，设置两个独立重复，检测值高的为高基线，检测值低的为低基线；两个基线的差异为系统误差；检测值高基线+系统误差的实验组即为有效的精准多肽；

S4)以步骤S3筛选的精准多肽负载PBMC细胞，而后培养，并在培养过程中，以精准多肽进行多次多肽冲击；

S5)冲击后继续培养，得到RFF细胞；

S6)用单抗药对步骤S5所得RFF细胞进行免疫抑制性信号分子的封闭，以得到RFF2细胞，所述免疫抑制性信号分子包括：PD-1、Tim-3、LAG3、CTLA-4、BTLA、VISTA、CD160、TIGIT、2B4(CD244)。

2.根据权利要求1所述的RFF2细胞的构建方法，其特征在于，步骤S3中，精准多肽的筛选标准为：

以FF细胞作为基线，设置两个独立重复，检测值高的为高基线，低的为低基线；

两个基线的差异为系统误差，数据分析时，对检测值低基线、高基线以及高基线+系统误差的，分别进行标注；检测值高基线+系统误差即为有效的精准多肽。

3.根据权利要求1所述的RFF2细胞的构建方法，其特征在于，在步骤S4中，重复多肽冲击3～4次。

4.根据权利要求1所述的RFF2细胞的构建方法，其特征在于，多肽冲击中，用浓度为10μg/mL～100μg/mL的多肽溶液进行多肽冲击。