[发明专利]一种具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽及其制备方法

说明书

本发明公开了一种具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽的制备方法。具体步骤如下：将新鲜银杏果脱壳、粉碎处理后提取粗蛋白；粗蛋白经蛋白酶酶解；酶解液超滤；超滤透过物经葡聚糖凝胶层析；层析液经液相色谱分离，获得具有降血压潜力的银杏蛋白肽，其氨基酸序列为：精氨酸‑缬氨酸‑苯丙氨酸‑天冬氨酸‑甘氨酸‑丙氨酸‑缬氨酸（RVFDGAV）。本发明制备的小肽，其血管紧张素转化酶（ACE）抑制活性高，氨基酸序列中不存在半胱氨酸残基，不需要添加保护活性肽的添加剂，制备工艺简单，成本低，产品质量高，适合工业化生产。

技术领域

本发明涉及一种具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽的制备方法，属于农产品精深加工技术领域。

背景技术

据世界卫生组织估计，每年有1750万人死于心血管疾病，而高血压是心血管疾病防治的重点。目前使用的降血压药物如卡托普利和依那普利由于咳嗽、皮疹和头痛等不良反应而受到限制。然而，心血管疾病的发病率不断增加，需要一些新的、安全的替代品，如食品衍生活性肽。生物活性肽是构成天然氨基酸的一系列序列不同多肽的总称。它们具有多种生物功能，如抗氧化、免疫促进、激素调节、抗菌、抗血栓、抗病毒、抗高血压等。而降血压肽，又称血管紧张素转换酶抑制肽，是从食物蛋白中分离出的一类具有显著降血压功效的多肽短链物质。多肽的体外降压活性主要是通过测定血管紧张素转化酶（ACE）的抑制活性来确定的。血管紧张素转化酶（ACE）是一种位于细胞膜上的二肽基羧肽酶，是调节血压的关键分子。降血压肽由于具有较高的食品安全性和生物利用度，是开发功能性肽类药物和功能性食品添加剂的潜在选择。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽的制备方法。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽，由以下氨基酸残基组成：精氨酸-缬氨酸-苯丙氨酸-天冬氨酸-甘氨酸-丙氨酸-缬氨酸（RVFDGAV）。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽的制备方法，包括下列步骤：

步骤1；对银杏果粉进行浸泡脱脂，得到脱脂银杏果粉；

步骤2：采用碱溶酸沉法提取脱脂银杏果粉中的蛋白质，得到的提取液透析后冻干，得到银杏蛋白；

步骤3：将蛋白配置成水溶液，加入碱性蛋白酶进行酶解，酶解结束后灭酶，然后离心取上清液，得到银杏蛋白酶解液；

步骤4：对银杏蛋白酶解液进行超滤处理，收集超滤透过液并冻干，得到银杏蛋白水解物；

步骤5：将银杏蛋白水解物配制成银杏蛋白水解物水溶液，以葡聚糖凝胶为层析介质对银杏蛋白水解物溶液进行层析，收集保留时间为87.36-102.23min的样品；

步骤6：将步骤5得到的样品先脱盐，然后进行冻干，再重新溶解于三氟乙酸水溶液中，然后采用C18反相色谱柱，流动相a为体积分数为0.1%甲酸水溶液，流动相b为含质量分数为0.1%甲酸的乙腈水溶液，其中乙腈的体积分数为84%；色谱柱以a溶液平衡后，样品由自动进样器上样，检测波长228nm；收集出峰时间25.46 min的洗脱液，获得具有具有ACE抑制活性的银杏果蛋白肽溶液；质谱分析结果表明，该银杏蛋白肽的氨基酸序列为：苏氨酸-天冬酰胺-亮氨酸-天冬氨酸-色氨酸-酪氨酸。

优选的技术方案为：步骤1中，将银杏果粉浸泡于乙酸乙酯中进行脱脂，脱脂结束后抽滤除去溶剂，干燥后得到脱脂银杏果粉；所述银杏果粉的粒径小于或等于40-80目。

优选的技术方案为：步骤2中，脱脂银杏果粉溶于蒸馏水中，并调pH值至10，搅拌过夜，离心后取上清液，然后调上清液的pH值至4.62，再次离心，弃上清液取沉淀，沉淀物在蒸馏水中透析后冻干，得到脱脂银杏蛋白。