[发明专利]一种中国恒河猴γδT细胞的培养方法

权利要求书

1.一种中国恒河猴γδT细胞的培养方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

（1）分离中国恒河猴外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）；

（2）分化、诱导、培养猴γδT细胞：步骤（1）的PBMCs用PBS重悬、洗涤2次，洗过的细胞经离心回收，每次400g离心10 min，最后用专用培养液重悬PBMCs，重悬的细胞密度为2×10⁶个细胞/mL，立即加入到48孔培养板，以3×10⁶个细胞/孔密度进行培养；每隔2-3天，弃去孔中一半体积的旧培养液，并添加新鲜的含中国恒河猴自体血清的OpTmizer细胞培养液，保持细胞浓度在0.5~2×10⁶个细胞/mL，最后将细胞悬液转移到培养板或细胞培养瓶中进行培养；

所述专用培养液的组成为：含有5%中国恒河猴自体血清、1%浓度为10⁴ U/mL青霉素-10⁴μg/mL链霉素、1‰的浓度为10mol/L的4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙磺酸（HEPES）、5μmol/L的唑来膦酸、1000U/mL的重组人白介素-2（IL-2），以及10ng/mL的猴白介素-18（rIL-18）的OpTmizer细胞培养基；

所述含恒河猴血清的OpTmizer细胞培养液为：含2%中国恒河猴自体血清、1%青霉素-链霉素、1‰的HEPES、1000 U/mL IL-2以及10ng/mL rIL-18的OpTmizer细胞培养液；

（3）培养细胞鉴定：猴细胞形态学观察、用流式细胞仪检测细胞表面CD3及TCR Vγ9表达水平、免疫激活表型以及猴γδT细胞分泌的IFN-γ的表达水平。