[发明专利]一种测定放线菌新种M8JJ-5中脂肪酸种类的方法在审
| 申请号： | 201910429157.9 | 申请日： | 2019-05-22 |
| 公开（公告）号： | CN110146638A | 公开（公告）日： | 2019-08-20 |
| 发明（设计）人： | 庹利;保玉心;张勇;陈荣祥;淳泽利;肖欣 | 申请（专利权）人： | 遵义医科大学 |
| 主分类号： | G01N30/88 | 分类号： | G01N30/88 |
| 代理公司： | 重庆强大凯创专利代理事务所(普通合伙) 50217 | 代理人： | 黄书凯 |
| 地址： | 563000 贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 放线菌 甲基化试剂 脂肪酸 皂化试剂 萃取溶剂 碱洗涤 试管 检测技术领域 细胞脂肪酸 气相色谱 样品测试 样品处理 有机层 质谱仪 制备 抽取 串联 并用 上层 分析 | ||
1.一种测定放线菌新种M8JJ-5中脂肪酸种类的方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一、试剂的制备：
①试剂1-皂化试剂：将45gNaOH溶于150mL甲醇内，并加入150mL蒸馏水；
②试剂2-甲基化试剂：190mL浓盐酸、275mL甲醇溶于135mL蒸馏水；
③试剂3-萃取溶剂：200mL正己烷与200mL甲基叔丁醚混合均匀；
④试剂4-碱洗涤试剂：10.8gNaOH溶于900mL蒸馏水；
步骤二、样品处理：
①将活化好的放线菌菌株M8JJ-5接种于R2A固体培养基中，在30℃培养至对数生长期后收获菌体培养物；
②皂化：取0.1g的菌体培养物置于试管中，并向试管内加入1～3mL的试剂1，拧紧试管盖并震荡5～10s，放入95～100℃的沸水浴中水浴30min；
③甲基化：打开管盖后，试管内加入1.9～2.1mL的试剂2，拧紧试管盖后震荡5～10s，在79～81℃的温度下水浴10min后取出冷却至室温；
④萃取：再向试管内加入1.15～1.3mL的试剂3，拧紧试管盖并快速震荡10min，离心后弃去下层水相；
⑤洗涤：加入2.8～3.2mL试剂4到试管内，并拧紧试管盖，震荡试管5min，离心3min；
步骤三、样品测试：
抽取试管内的上层有机层注入到气相色谱串联TraceISQ质谱仪内，并用Nist08Library软件进行分析。
2.根据权利要求1所述的测定放线菌新种M8JJ-5中脂肪酸种类的方法，其特征在于：所述皂化中将试管水浴5min后取出震荡10s，再继续水浴加热25min。
3.根据权利要求2所述的测定放线菌新种M8JJ-5中脂肪酸种类的方法，其特征在于：所述皂化步骤中加入3mL的试剂1。
4.根据权利要求3所述的测定放线菌新种M8JJ-5中脂肪酸种类的方法，其特征在于：所述洗涤中离心的转速为2000r/min。
5.根据权利要求4所述的测定放线菌新种M8JJ-5中脂肪酸种类的方法，其特征在于：所述皂化中水浴的温度为100℃。
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