[发明专利]一种测定叶绿素铁钠盐的方法

权利要求书

1.一种测定叶绿素铁钠盐的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)标准曲线方程的建立：

对于多个浓度已知、且彼此之间浓度存在差异的叶绿素铁钠盐溶液标准品，首先以其中任意一个叶绿素铁钠盐溶液标准品作为对象，在紫外分光光度计下进行230-900nm的全波长扫描，确定最大吸收波长；接着，将所述最大吸收波长作为液相色谱仪中紫外检测波长，利用该液相色谱仪以全部叶绿素铁钠盐溶液标准品分别作为对象进行检测，得到各个已知浓度的叶绿素铁钠盐溶液标准品它们所对应的液相色谱图；然后，通过质谱检测确认其中任意一个液相色谱图中叶绿素铁钠盐的出峰位置；再对于任意一个液相色谱图，在叶绿素铁钠盐出峰位置进行积分，得到与该液相色谱图对应的叶绿素铁钠盐的峰面积，如此针对全部液相色谱图，即可得到峰面积随叶绿素铁钠盐浓度的标准变化关系，即，峰面积-叶绿素铁钠盐浓度的标准曲线方程；

(2)对待测样品的浓度测定：

以待测叶绿素铁钠盐浓度的待测样品为对象，利用所述液相色谱仪进行检测，得到该待测样品的液相色谱图；接着，对该待测样品的液相色谱图，在叶绿素铁钠盐出峰位置进行积分，得到叶绿素铁钠盐的峰面积；然后，将该峰面积带入所述步骤(1)得到的峰面积-叶绿素铁钠盐浓度的标准曲线方程中，计算得到相应的叶绿素铁钠盐浓度值，该叶绿素铁钠盐浓度值也即所述待测样品的叶绿素铁钠盐浓度值，由此实现叶绿素铁钠盐的浓度测定；

并且，所述步骤(1)中所述液相色谱仪与所述步骤(2)中所述液相色谱仪的参数设置完全保持一致。

2.如权利要求1所述测定叶绿素铁钠盐的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述液相色谱仪的参数设置同时包括进样量、检测器、柱温箱温度、色谱柱选择、流动相及流动相流速的设置；

优选的，进样量设置为10uL，检测器设置为紫外检测器，柱温箱温度设置为30℃，色谱柱选为Poroshell 120 EC-C18 4μm，流速设置为1.0mL/min；

所述流动相包括配合使用的流动相A和流动相B，其中，所述流动相A是由甲醇、水及乙酸按70：20：10的体积比配比混合而成，所述流动相B是由甲醇、丙酮、水及乙酸按60：25：5：10的体积比配比混合而成；相应梯度洗脱程序为：第0min时，流动相A占比100％、流动相B占比0％；第5min时，流动相A占比0％、流动相B占比100％；第25min时，流动相A占比100％、流动相B占比0％；进样间隔平衡时间为5min；

或者，所述流动相A是由甲醇、水及乙酸按60：30：10的体积比配比混合而成，所述流动相B是由甲醇、乙腈、水及乙酸按50：25：15：10的体积比配比混合而成；相应梯度洗脱程序为：第0min时，流动相A占比100％、流动相B占比0％；第15min时，流动相A占比0％、流动相B占比100％；第25min时，流动相A占比100％、流动相B占比0％；进样间隔平衡时间为5min；

并且，所述流动相所采用的试剂均为色谱纯，所述乙酸是质量分数为0.2％的乙酸溶液，水为超纯水。

3.如权利要求1所述测定叶绿素铁钠盐的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述通过质谱检测确认其中任意一个液相色谱图中叶绿素铁钠盐的出峰位置，具体是先设置质谱检测参数，运行仪器得到叶绿素铁钠盐溶液的质谱图，通过质谱库确认叶绿素铁钠盐的位置，同时分析目标峰的纯度。

4.如权利要求3所述测定叶绿素铁钠盐的方法，其特征在于，所述质谱检测参数如下：质谱操作条件ESI离子源，分子量扫描范围650-750。