[发明专利]用于三体综合征检测的组合套装

说明书

本发明提供了一种用于检测三体综合征的组合套装，所述套装包含用于检测目标基因、参照基因及其片段至少一个区域内甲基化或去甲基化状态和数量的核酸。其中，所述目标基因包括：HLCS或DSCR8基因及其片段、SERPINB5或NFATC1基因及其片段、FLT1、SUGT1L1或COL4A1基因及其片段；所述参照基因包括：RUNX3基因及其片段或PPT2基因及其片段。本发明所述组合套装实现了无创的、快速准确的产前21‑、18‑、13‑三体综合征的检查。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于三体综合征检测的组合套装，具体涉及一种体外检测21-、18-、13-三体综合征的组合套装。

背景技术

染色体三体综合征(简称“三体综合征”)是染色体异常导致的一类疾病，主要包括：21-三体综合征(Down综合征)、18-三体综合征(Edwards综合征)、和13-三体综合征(Patau综合征)。三体综合征是高龄孕妇胎儿的常见染色体疾病；其主要特征有外貌异常、发育迟缓、智能障碍、多发畸形等。三体综合征严重影响胎儿出生前的正常发育和出生后的生存、健康成长。由于三体综合征目前尚无有效治疗方法，生产前终止妊娠是怀有三体综合征患儿的孕妇的主要选择。因此，怀孕早期的三体综合征筛查和诊断是产前诊断的重要组成部分。

目前三体综合征的筛查是结合孕妇血清绒毛膜促性腺激素(HCG)、甲胎蛋白(AFP)、游离雌三醇(FE3)的检测和超声检测，并根据孕妇年龄和体重来推算怀有综合征患儿的风险率；进一步根据风险率的高低进行确诊检查。三体综合征的确诊方法为羊水细胞染色体核型分析。三体综合征血清学检查方法的检测准确性低。低检测准确性会导致患有三体综合征胎儿的漏检，错过生产前终止妊娠的最佳阶段。另一方面，低检测准确性还会产生正常胎儿假阳性检测结果，导致后续不必要的羊水细胞检查。由于羊水细胞的采集需要穿刺操作，而穿刺操作所带来的流产风险是难以避免的。因此，提高羊水细胞染色体核型分析前的三体综合征微创筛查的准确性对于提高三体综合征筛查的有效性具有重要临床价值和意义。

“液体活检”概念的提出是体外诊断技术的重大里程碑。“液体活检”在三体综合征检测的应用是“液体活检”对临床检测领域的一项重要贡献。三体综合征“液体活检”的原理是：在怀孕过程中，孕妇体内胎儿的胎盘组织释放的胎源DNA进入孕妇外周血中；通过检测和分析孕妇外周血中的游离DNA，可以检测到胎儿基因组DNA，从而可以应用于检测胎儿染色体异常。孕妇外周血游离DNA中的主要部分来源于孕妇外周血白细胞基因组DNA，胎源DNA在孕妇外周血游离DNA中所占比例很低。因此，在大量孕妇正常外周血白细胞基因组DNA的背景下，由胎儿三体综合征导致的21、18、13号染色体DNA含量的变化被稀释和掩盖。以21号染色体三体综合征为例：21-三体综合征胎儿的基因组DNA中，21号染色体DNA拷贝数是其他正常染色体的1.5倍；然而在孕妇外周血游离DNA中，由于孕妇外周血白细胞基因组DNA的稀释(假设胎源DNA占孕妇外周血游离DNA的10％)，孕妇外周血游离DNA中21号染色体DNA拷贝数只有其他正常染色体的1.05倍。在这种情况下，三体综合征的“液体活检”对检测技术的灵敏性和准确性提出了极大挑战。

为解决这一技术问题，近二十年间基于不同技术路线的三体综合征产前无创检测技术(NIPT)不断出现。在所有技术路线中，基于二代测序技术(NGS)的NIPT逐步发展成为一种广泛应用的产前检测项目。这一技术路线是基于NGS高通量的技术特性，通过对与三体综合征相关的21、18、13号染色体和其他正常参照染色体上大量位点的检测和复杂的分析算法来判断21、18、13号染色体非整倍体异常。

基于NGS的NIPT具有高度准确性，但检测成本高、检测周期长、操作复杂是这一技术固有的缺陷。基于NGS的NIPT技术之外，近年来还出现了基于不同生物学原理开发的三体综合征NIPT技术，例如：1)利用21、18、13号染色体上的SNP开发的三体综合征NIPT技术；2)利用21、18、13号染色体上胎盘组织特异表达的mRNA开发的三体综合征NIPT技术；3)利用21、18、13号染色体上胎盘组织特异性甲基化或去甲基化位点的检测。