[发明专利]一种提取太岁组织中细菌DNA的材料前处理方法

说明书

本发明提供了一种提取太岁组织中细菌DNA的材料前处理方法，包括以下步骤：a、测定太岁组织的溶解温度；b、将若干太岁组织切块加入到水中，并置于水浴锅中，在溶解温度下保温，使太岁组织切块在10min内溶解，从而得到太岁组织溶解液；c、使用一次性针头滤器过滤步骤b所得的太岁组织溶解液，使太岁组织溶解液中的细菌菌体富集在滤膜上；d、取出步骤c的滤膜并切碎，然后按照常规细菌DNA提取方法提取DNA。本发明能够使太岁组织彻底分散，同时通过物理去除多糖类物质，避免了DNA提取过程中多糖类物质的干扰，适用于在热水中能够溶解的太岁。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说涉及一种提取太岁组织中细菌DNA的材料前处理方法。

背景技术

太岁是一种在中国古籍中有记载，现代又不断被发现的神秘物体。该类物体形态各异，但大体呈圆形，共同特征是高度组织化，有韧性不易撕裂，质感如肉似胶，有的在外部具耳片状和蜂窝状褶皱，有的在内部具明显的纤维状纹理，此二特征均非化工胶体脱模所能仿制，另外，大部分太岁还能遇开水即溶化。

从1992年陕西渭河的首例太岁报道至今，学术界一直在研究其形成之谜。化学分析表明，太岁中含有核酸（2.053～35.1286 μg/g）、蛋白质（20.35～184.18 mg / g）、多糖（8.97～46.57 mg / g）等生物体中最基本的要素；主体物质是聚乙烯醇（70%），但并不能排除其生物成因可能性。由于其多发现于土层中，不含光合色素，故倾向于认为是一种菌类，并试图通过研究其菌类构成，以确定其生物学分类地位。

培养方法是获得菌类纯种的经典方法，在做太岁组织浸提液常规涂板培养时，出现数量最多的菌类是细菌，并且其种类会随着培养基配方、pH值和氧气条件的不同而变化，提示太岁中包含有多种细菌，也不排除还有大量的不可培养类型。因此，要通过该方法获得太岁中细菌的全部信息既工作量浩繁，又近乎不可能。基于此，非培养方法，如16S rDNA克隆文库、末端限制性片段长度多态性分析(T-RFLP)、16S rDNA高通量等方法，逐渐被用来研究太岁中细菌的菌群结构。但测定的结果，除再次表明太岁细菌种类丰富外，在不同太岁间并没有获得高占比共有优势属，甚至在产地、形态相同的两个太岁间亦未有，其中，一个是盐单胞菌属（Halomonas 24.71%），另一个是芽孢杆菌属（Bacillus 17．60％）。不同测试结果间的巨大差别，根源实际上是分析用DNA间的差别。这些测试所用DNA，其提取方法的一个共同点都是把太岁组织进行了简单的研磨处理。这种材料处理方法存在一个明显缺陷，即没有根据太岁材料特性做针对性改变，表现在两个方面：一是组织未被真正破碎，所谓研磨烂的太岁组织，在DNA提取过程中会重新粘结成团，团内的菌体不能与裂解液接触被裂解，即太岁中各种细菌释放基因的机会是不同的，所以，提取到的DNA不能真实代表细菌的全部信息；二是太岁中的多糖、聚乙烯醇为主的多羟基类物质（均呈多糖反应，文中统称为多糖类物质），会溶解到裂解液中，提高了液体的粘滞性，DNA分子极难游离出来，形成了培养时出菌很多，却提取不到DNA或产量极低的奇怪现象，同样也干扰了细菌信息的正确获取。

综上可知，由于目前缺乏适合太岁材料特性的组织处理方法和降低多糖类物质干扰的方法，提取不到能真实代表太岁中细菌信息的DNA，因而制约了太岁分子生物学研究的进程。

发明内容

本发明的目的就是提供一种提取太岁组织中细菌DNA的材料前处理方法，以解决现有技术提取不到能真实代表太岁中细菌信息的DNA的问题。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种提取太岁组织中细菌DNA的材料前处理方法，包括以下步骤：

a、将若干太岁组织切块1加入到水中，并置于温度可调的水浴锅中；

b、梯度升高水浴锅的温度，测出在水浴10 min时，能够使太岁组织切块1完全软化成泥并溶解的温度；