[发明专利]一种用于HBV miR-3荧光定量PCR的检测材料及试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于HBV miR‑3的荧光定量PCR检测材料及试剂盒，其中荧光定量PCR检测材料包括6组逆转录引物、qPCR前引物、qPCR后引物和特异性荧光探针。提供的6组荧光定量PCR检测材料具有非常显著的特异性，直接使用SYBR Green染料，其阴性对照也基本不存在非特异干扰；结合TaqMan MGB探针后，阴性对照的非特异干扰完全消除，定量范围上，覆盖7个数量级，从10⁸至10²，决定系数R²为0.997，说明在定量方面覆盖范围广，定量效果好，在样品HBV miR‑3浓度较低时也能准确定量。相比较现有技术而言，本发明的定量效果更好，结果更为可信。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，涉及一种用于HBV miR-3荧光定量PCR的检测材料及试剂盒。

背景技术

miRNA作为一类重要的调节基因表达的内源性分子，已有大量的研究表明其具有疾病诊断，发展及预后判断的重要价值。比如在癌症领域，有大型队列研究验证了血清中组合miRNA 检测可筛查早期肺癌；也有研究验证了血清中两种miRNA可作为前列腺癌患者手术治疗情况的评价因子。在传染病领域，研究发现病毒可编码miRNA，与肿瘤的发生有关，且病毒的 miRNA可在患者血清中检测到，与炎症生物标志物相关。表明了病毒编码的miRNA在传染病领域具有潜在的疾病评价意义。

乙型肝炎的发生是由乙肝病毒(Hepatitis B virus,HBV)慢性感染导致，中国的慢性感染率为5％-8％。在HBV的miRNA领域的研究中，2007年首次通过了生物信息学的分析发现了 HBV可能编码miRNA，但并未得到验证。直到2017年，Yang等人验证了HBV可编码miRNA，确定了其序列并将其命名为HBV miR-3，且通过生物学实验验证其存在。因此，这是第一篇公开发表HBV miR-3的文献。该文献采用了Chen等人在2005年发表的茎环法RT-PCR(Stem- loop RT-PCR)的方法对HBV-miR-3进行检测，但Yang等人并未使用特异性荧光探针，因此该检测方法的特异性仍有待提高。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供一种用于HBV miR-3的荧光定量PCR检测材料。

本发明要解决的另一技术问题是提供一种用于检测HBV miR-3的SYBR Green荧光定量试剂盒。

本发明要解决的还一技术问题是提供上述试剂盒的使用方法。

本发明要解决的还一技术问题是提供一种用于检测HBV miR-3的TaqMan荧光定量试剂盒。

本发明要解决的还一技术问题是提供上述试剂盒的使用方法。

本发明所采取的技术方案是：

提供一种用于HBV miR-3的荧光定量PCR检测材料，包括以下A～F共6组逆转录引物、qPCR前引物和qPCR后引物，

A：逆转录引物序列为：

CGCGAGCACAGAATTAATACGACTCACTATACGCGAAACGCCGCA(SEQ ID NO.1)；

qPCR前引物序列为：

TGTGCCCGCTGGATGTGTC(SEQ ID NO.2)；

qPCR后引物序列为：

CGCGAGCACAGAATTAATACG(SEQ ID NO.3)；

B：逆转录引物序列为：

CCCATCCCACACACAGCCTGCGAGACTGAGGGATGGGAAACGCCG(SEQ ID NO.5)；

qPCR前引物序列为：