[发明专利]一种测定人血浆中沙库巴曲、去乙基沙库巴曲和缬沙坦浓度的方法

说明书

本发明涉及检测人血浆中药物浓度的方法，以甲醇蛋白沉淀法对样品进行前处理，并进行进一步稀释，应用超高效液相色谱串联质谱进行检测。本发明提供的方法可以同时检测沙库巴曲、去乙基沙库巴曲和缬沙坦三种物质，且对色谱柱和仪器损害小。

技术领域

本发明涉及检测人血浆中药物浓度的方法。具体而言，本发明涉及一种通过超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定人血浆中沙库巴曲、去乙基沙库巴曲和缬沙坦浓度的方法。

背景技术

沙库巴曲缬沙坦钠，适用于射血分数降低的慢性心力衰竭(NYHA Ⅱ-Ⅳ级，LVEF≤40％)成人患者，能降低心血管死亡和心力衰竭住院的风险。另外，沙库巴曲缬沙坦钠可代替血管紧张素转化酶抑制剂或血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂，可与其他心力衰竭治疗药物合用。沙库巴曲缬沙坦钠是一种首创的双效血管紧张素受体-脑啡肽酶抑制剂，具有独特的作用模式，能够增强心脏的保护性神经内分泌系统(钠尿肽系统)，抑制有害系统(肾素-血管紧张素-醛固酮系统)，同时表现出了超越常规药物的更高安全性。口服给药后，沙库巴曲缬沙坦钠以沙库巴曲(脑啡肽酶抑制剂前药)：缬沙坦＝1:1的比例分布于全身，然后沙库巴曲迅速被非特异性酯酶代谢为活性的脑啡肽酶抑制剂—去乙基沙库巴曲。

为同时检测人体血浆当中沙库巴曲(AHU377)、去乙基沙库巴曲(LBQ657)和缬沙坦(Valsartan)的量，现有技术开发了一系列检测方法。

Mizuki Akahori等发表的文章(Pharmacokinetics after single ascendingdose,food effect,and safety of sacubitril/valsartan(LCZ696，),an angiotensinreceptor and neprilysin inhibitor,in healthy Japanese subjects.[J]Eur J DrugMetab Pharmacokinet,2016.)，应用液液萃取处理血浆样品，并采用HPLC-MS/MS检测AHU377、LBQ657和Valsartan三种物质。该方法虽然可以检测三种物质，但是前处理方法毒性较大，对技术人员造成较大的伤害且处理过程较为繁琐。且流动相采用0.1％甲酸水-0.1％甲酸乙腈，甲酸量较大,长期使用对色谱柱有较大损害。

Raja Harandha等发表的文章(Development and validation of a reliableand rapid LC-MS/MS method for simultaneous quantification of sacubitril andvalsartan in rat plasma and its application to a pharmacokinetic study.[J]Biomedical Chromatography,2016.)，采用甲酸-乙腈蛋白沉淀法，并采用UPLC-MS/MS检测大鼠血浆样品中的沙库巴曲和缬沙坦。该方法虽然采用蛋白沉淀法，但是并未对处理后的样品进行稀释，后续一方面会对色谱柱造成较大破坏，也会因为样品中的杂质较多对液相系统和质谱造成堵塞。流动相为0.1％甲酸水-0.1％甲酸乙腈且采用梯度洗脱的方式，甲酸的量也会对色谱柱造成较大的破坏，梯度洗脱的方式也不稳定。并且本方法仅检测了AHU377和Valsartan两种物质。

目前，现有技术中缺乏一种可以快速检测沙库巴曲、去乙基沙库巴曲和缬沙坦三种物质，并对仪器设备和技术人员友好的方法。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种新的检测方法，该方法可以同时检测沙库巴曲、去乙基沙库巴曲和缬沙坦三种物质，操作简单，毒性小，样品前处理后进一步稀释对色谱柱和仪器损害小，采用等度洗脱即可实现分析物有效分离，色谱系统也更加稳定。

本发明的目的是提供一种同时检测人血浆样品中沙库巴曲、去乙基沙库巴曲、缬沙坦浓度的方法：

样品前处理：甲醇蛋白沉淀法；