[发明专利]一种多酚类位置异构体定性方法

说明书

本发明涉及一种多酚类位置异构体定性方法，包括：在正离子模式下，以多个碰撞能对化合物的不同位置异构体进行二级质谱分析；计算母离子和子离子在二级质谱图中的相对强度，并绘制相对强度随碰撞能的变化曲线；根据相对强度的变化曲线对化合物的不同位置异构体进行定性判断。实现了对黄酮醇类糖苷化合物、咖啡酰奎宁酸类化合物的深度结构解析，能够有效地鉴别黄酮醇类糖苷化合物C‑3和C‑7位置异构体、以及单咖啡酰奎宁酸和二咖啡酰奎宁酸位置异构体等。

技术领域

本发明属于分离分析化学领域，具体涉及一种多酚类位置异构体定性方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

液相色谱-质谱联用技术，它以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。样品在质谱部分和流动相分离，被离子化后，经质谱的质量分析器将离子按质量数分开，经检测器得到质谱图。液质联用体现了色谱和质谱优势的互补，将色谱对复杂样品的高分离能力，与质谱具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来。目前，液相色谱-质谱联用技术由于其高灵敏度、高分辨率的特点，使其在天然产物、药物分析、食品分析和环境分析等许多领域得到了广泛的应用。

多酚类化合物是植物中分布最广泛且具有重要生理功能的一类次生代谢物。多酚类化合物在植物遭受侵染、辐射、干旱、高温等逆境胁迫时起到消除活性氧自由基，保护植物免受损伤的防御作用。从天然产物中分离得到的多酚类化合物具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、降血糖、降血脂以及增强免疫等药效活性，是天然药物发挥作用的活性物质基础，也是创新药物发现的重要来源。多酚类化合物往往存在很多位置异构体(位置异构体指的是质量数相同，而取代基连接位置不同)。连接位置的不同会引起其生理功能、药效活性的显著不同。多酚类化合物位置异构体的准确定性对植物生理学和现代医药学的发展起着至关重要的作用。

发明人发现：多酚类化合物，如：黄酮醇糖苷、咖啡酰奎宁酸化合物等，在使用二级质谱分析定性时，其位置异构体的碎片离子种类是完全一样的，准确定性十分困难。

发明内容

为了克服上述问题，本发明的目的之一是建立一种多酚类位置异构体的二级质谱定性方法，通过对黄酮醇糖苷化合物、咖啡酰奎宁酸化合物二级质谱母离子和子离子特征的深度结构解析，实现了对黄酮醇糖苷、咖啡酰奎宁酸化合物的位置异构体的准确定性。

为实现上述技术目的，本发明采用的技术方案如下：

一种多酚类位置异构体定性方法，包括：

在正离子模式下，以多个碰撞能对化合物的不同位置异构体进行二级质谱分析；

计算母离子和子离子在二级质谱图中的相对强度，并绘制相对强度随碰撞能的变化曲线；

根据相对强度的变化曲线对化合物的不同位置异构体进行定性判断。

在一些实施例中，所述化合物为黄酮醇糖苷或咖啡酰奎宁酸化合物。

黄酮醇是分布最广泛的黄酮类质之一，几乎存在于除藻类以外的所有植物中，具有广泛的药理活性和潜在的药用价值。

因此，本发明的目的之二是提供一种上述位置异构体质谱定性方法在植物中黄酮醇类糖苷定性的应用。

在一些实施例中，所述黄酮醇糖苷的黄酮醇苷元包括：山奈酚、槲皮素、杨梅素、异鼠李素、木犀草素。

在一些实施例中，所述黄酮醇糖苷为黄酮醇糖苷C-3和C-7位置异构体。与利用负离子模式下苷元离子和苷元的自由基离子(质量数相差为1)进行定性区分不同，本申请使用正离子模式下的母离子(分子离子峰)和苷元离子的分析方法是基于空间位阻的大小，检测结果更为准确，重复性好、适用范围更广。