[发明专利]一种检测血液中孕激素受体膜组分1蛋白的微流控免疫分析芯片及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种检测血液中孕激素受体膜组分1蛋白PGRMC1的微流控免疫分析芯片及其制备方法和应用；本微流控免疫分析芯片由芯片和固相反应基底及包被在固相反应基底上的特异性抗原PGRMC1组成；芯片为带有并行微流管道的片状结构，固相反应基底上的特异性抗原PGRMC1为并行条状平面结构，与所述芯片微流管道相互垂直，交叉角度为90°；PGRMC1是与孕激素相关乳腺癌的可能潜在标志物，通过检测全血中的PGRMC1的含量，可为乳腺癌早期诊断提供可能；该检测方法将微流控免疫分析芯片和化学发光相结合，兼具了微流控免疫分析芯片的快速、高效和样品用量小，化学发光特异性好、操作简单、成本低、高通量等优点，具有乳腺癌的早期诊断应用前景。

技术领域

本发明涉及生物分析技术领域，具体涉及一种检测血液中孕激素受体膜组分1蛋白的微流控免疫分析芯片及其制备方法和应用。

背景技术

构建高灵敏分析方法一直是分析化学及生命学科追求的目标之一。高灵敏分析方法推动了分析化学的发展及其在临床诊断、环境监测、食品安全、生物成像等领域的应用。在重大传染病、细菌或病毒感染、癌症等疾病的早期诊断以及食品和环境中痕量有毒物质的筛查中，高灵敏分析方法尤为重要。以抗体-抗原特异性识别为基础的免疫生物标记分析方法是一种将生物标记技术的高灵敏性和免疫反应的高度特异性结合在一起的分析方法，具有灵敏度高、特异性好、分析快速等优点。酶联免疫是其中的代表，该方法具有特异性强、重复性好、操作简单、成本低、易于商品化和自动化等优点。但传统的酶联免疫分析方法一般都是基于免疫标记酶和底物之间的一次酶促信号放大，其灵敏度只能达到ng/mL。同时，酶联免疫分析方法反应时间长，劳动强度大。在需要高灵敏度、临床快速诊断的分析领域，传统的酶联免疫分析方法很难满足需要，因此，研究建立简单便捷快速的高灵敏高通量技术方法是至关重要的。

在全球女性群体中，乳腺癌已经成为最常见的浸润性癌症之一，女性一生中罹患乳腺癌的概率为1/8。2015年中国肿瘤新发病例数为429.2万，其中女性乳腺癌发病人数为26.86万，占到女性新发肿瘤的15％,其中45～59岁的发病率为23％。这个年龄阶段正是女性的围绝经或绝经阶段。激素治疗是目前治疗绝经相关症状最有效的方法，它对维持绝经妇女身体健康、提高生活质量具有其他任何单一药物不能取代的作用。但是目前有研究认为，激素治疗会使乳腺癌发生风险增加。妇女经过5年以上的雌/孕激素联合治疗，乳腺癌风险将增加(HR＝1.24,95％CI:1.01～1.54)。此外，也有大部分的临床研究显示，激素治疗超过5年，乳腺癌的发病风险增加。有研究发现，健康女性乳腺内存在恶性细胞的概率是40％，有一部分女性即使在内源性雌激素、孕激素的刺激下，乳腺恶性细胞也可能会发生快速增生而发展为临床乳腺癌。如能早期检测雌激素、孕激素相关乳腺癌风险，筛选出乳腺癌高危患者并采取相应措施，对减少激素治疗的乳腺癌风险具有重要指导意义。但是直到现在，临床上关于乳腺癌风险血清学标志物均缺乏一定的敏感度、特异度。在最近十几年，发现了一些新的孕激素受体膜组分，其中孕激素受体膜组分1(progesterone receptor membranecomponents 1，PGRMC1)，雌激素、孕激素联合治疗可以明显促进PGRMC1表达阳性的乳腺癌细胞的增生，体外研究显示，体外雌激素、孕激素对MCF7/PGRMC1与未转染PGRMC1的乳腺癌细胞(MCF7)增生作用有明显不同，雌激素和某些孕激素明显增加了转染了PGRMC1的乳腺癌细胞的增生，并可能参与了肿瘤发生。近几年陆续有关于PGRMC1在实体瘤中表达情况的报道，但研究结果不一致，同时这些临床数据比较零散，研究样本量小，绝大部分研究集中于评估乳腺癌组织中特定的细胞结构而无法对患者血液中PGRMC1的表达进行检测和评估，而后者对于激素治疗前的常规风险筛查十分必要。

综上所述，本领域有必要筛选确定PGRMC1是否为一种新的、合适的乳腺癌肿瘤标记物，同时很有必要研究开发检测灵敏度高、检测更为简单方便、高通量，适合于快速现场检测的免疫检测分析新技术新方法。

发明内容