[发明专利]一种组织细胞固定方法

说明书

本发明公开了一种组织细胞固定试剂及组织细胞固定方法，所述细胞固定试剂的有效成分为C₁₆H₂₈O₄N₃。组织细胞固定方法的步骤如下：（1）、在组织细胞培养基中加入适量PBS缓冲液；（2）、将配置好的如权利要求2所述的细胞固定试剂加入PBS缓冲液中，所述细胞固定试剂与PBS缓冲液的体积分数比为1%‑20%，固定0.5‑4小时，本发明的细胞固定试剂毒性低，无挥发性，对组织细胞的固定效果较好，PBS缓冲液中可维持6个月以上的固定效果。本发明提供的固定方法与其他细胞固定方法相比较，突出优点为离子液体不挥发，对人体没有危害，另外具有操作简单，成本低，固定后细胞可长期保存于PBS水溶液中，且细胞固定效果较好。

技术领域

本发明涉及一种组织细胞固定方法，属于生物技术领域。

背景技术

组织细胞固定剂的种类较多，目前常用的细胞固定剂主要有：醛类(常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛)、醇类(常用乙醇)、其它(丙酮)。

醛类：

甲醛(福尔马林)应用最广，原理：形成分子间的交联，影响蛋白构型而使之固定。优点：形态结构保存好，且穿透性强，组织收缩少。缺点：甲醛放置过久可氧化为甲酸，使溶液pH降低，影响染色；醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍；分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。

戊二醛，穿透性强，微细结构保存好，但对抗原有一定影响，常与其他固定剂联合用作免疫电镜固定液。

多聚甲醛(常用4％)，可用于免疫电镜；也可用于免疫荧光染色。主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原，例如各类淋巴细胸分化决定簇(CD)、主要组织相容性抗原等。

醇类：

最常用的醇类固定剂是乙醇。其固定作用：使细胞内蛋白、糖类发生沉淀。

优点：穿透性强、抗原性保存好。缺点：脱水性强，易引起组织收缩、变硬，影响切片质量，因而乙醇固定时间不宜过长(2h内)。乙醇使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解；染色过程中，温育时间长，抗原可流失而减弱反应强度。

其它固定剂：

丙酮，对抗原性的保存好，但脱水性更强，较少用于组织标本，但细胞爬片常用丙酮固定。

上述细胞固定液都是传统挥发性溶剂，对人体也有一定的危害。

发明内容

为了克服上述不足，本发明提供了一种新的组织细胞固定试剂及组织细胞固定方法，采用离子液体来代替传统的细胞固定剂。

离子液体,通常也称室温离子液体,是在室温或低温下℃呈液态的盐。它一般由体积相对较大、不对称的有机阳离子和体积相对较小的无机阴离子所组成,由于阴阳离子数目相等,因而整体上显电中性。离子液体具有优良的物理化学性质以及可修饰、调变的阴阳离子结构。以离子液体作为反应体系的溶剂或催化剂,由于无蒸气压、液态温度范围宽,分离易于进行,兼有均相催化效率高、多相催化易分离的优点,且可以循环使用,近年受到了各领域学者的广泛关注。

本发明的技术方案如下：

一种组织细胞固定试剂，所述细胞固定试剂是一种离子液体，其有效成分为C₁₆H₂₉O₄N₃，化学结构式为：

所述细胞固定剂为C₁₆H₂₉O₄N₃与水的混合液。