[发明专利]一种成纤维细胞规模化的培养方法及其培养装置在审
| 申请号： | 201910403617.0 | 申请日： | 2019-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN110129261A | 公开（公告）日： | 2019-08-16 |
| 发明（设计）人： | 张永国;何君 | 申请（专利权）人： | 张永国 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077;C12M3/00;C12M1/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100071 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 成纤维细胞 规模化 接种 培养细胞 培养装置 微载体 细胞成活率 搅拌培养 培养基 血清 灭菌 | ||
1.一种成纤维细胞规模化的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
将待培养细胞与灭菌后的GE微载体接种于含血清的培养基中，接种后的所述GE微载体的总浓度为0.1-1wt％，搅拌培养24h以上，即可；
所述待培养细胞的接种密度为(8-10)*103cell/ml。
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，接种后所述GE微载体的总浓度为0.2-0.8wt％之间。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，接种后所述GE微载体的总浓度为0.5wt％。
4.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，接种后10-15rpm搅拌培养24-26h，18-30rpm搅拌培养24-72h。
5.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述GE微载体为Cytodex 1 GE。
6.根据权利要求1-5任一项所述的培养方法，其特征在于，搅拌培养72h以上后，吸取培养上清液，采用生理盐水洗涤，添加胰酶消化后，加入含血清的培养基，微载体脱落后，再添加新的GE微载体，即可。
7.根据权利要求6所述的培养方法，其特征在于，添加胰酶消化40-60s。
8.权利要求1-7任一项所述的成纤维细胞规模化的培养装置，其特征在于，包括：用于装有GE微载体与待培养细胞的生物培养器，无菌培养袋；
所述无菌培养袋与所述生物培养器的进口通过接头连接；
优选地，所述生物培养器为中空纤维柱，截留的细胞分子量在100-3000MW之间。
9.根据权利要求8所述的培养装置，其特征在于，在所述无菌培养袋与所述生物培养器之间设置有用于将培养基循环排出的变速泵。
10.根据权利要求9所述的培养装置，其特征在于，所述无菌培养袋为多个，所述生物培养器为多个，所述变速泵为单个，每个所述无菌培养袋与对应的所述生物培养器均通过所述变速泵连接；
优选地，所述无菌培养袋为两个，互相对称设置；
优选地，所述生物培养器为两个，互相对称设置；
优选地，所述培养装置放置在所述CO2培养箱内，利用CO2、N2的气体来控制溶氧和pH指标。
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