[发明专利]一种阿达木单抗抗药抗体的胶体金试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种阿达木单抗抗药抗体的胶体金试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括阿达木单抗抗药抗体的胶体金检测试纸条、样本稀释液A和样本稀释液B；所述样本稀释液A选自pH 1‑3的盐酸、醋酸、柠檬酸或甘氨酸溶液；样本稀释液B选自pH 7.5‑9的甘氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、Tris‑HCl缓冲液或硼酸‑硼砂缓冲液。本试剂盒检测方便，灵敏度高，对样品中高浓度的药物和抗体耐受度高，可用于检测血浆、血清或体液中的阿达木单抗的抗药抗体。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种阿达木单抗抗药抗体的胶体金试剂盒及其制备方法。

背景技术

阿达木单抗为抗人肿瘤坏死因子(TNF-alpha)的人源化单克隆抗体，是一种生物技术药物。阿达木单抗在中国目前获批用于两个适应症，分别为类风湿关节炎、强直性脊柱炎。由于生物技术药物具有免疫原性特点，给药后有诱导体内产生抗药抗体的可能性。抗药抗体的产生会影响药物的清除、改变药物的药效学和药代动力学特征。在阿达木单抗的关键性临床研究中，接受阿达木单抗治疗的1053名患者中，有5.5％(58名)检测到阿达木单抗抗药抗体，在没有联合使用甲氨蝶呤的患者组别中，该比例为12.4％。阿达木单抗抗药抗体的形成与药物清除的增加以及阿达木单抗效力下降有关。因此，对于接受阿达木单抗药物治疗的患者，定期或不定期的快速、可靠地进行阿达木单抗抗药抗体检测，对于治疗药物检测、控制疾病进程等具有十分重要的意义。

目前，在生物技术药物抗药抗体的检测方法主要有以下几种方法：酶联免疫(ELISA)法、电化学发光免疫(ECL)法、放射免疫分析(RIA)法和表面等离子共振(SPR)法。该四种方法均需要昂贵的仪器设备，对检测人员的专业技术要求较高。同时，且样品前处理繁琐费时、检测费用高，难以满足高通量、快速、在线检测的需要，不适合基层医务人员现场操作。

在抗药抗体检测中，血浆中残留的药物对抗药抗体的检出率会产生严重的影响。因此，对于抗药抗体检测方法，一般要求具有一定的药物耐受度。采用酶联免疫或电化学发光免疫法检测抗药抗体时，为提高检测方法的药物耐受度，提高检出率，一般会通过酸解、均相孵育等手段，对血浆或者样本进行较为复杂的前处理。然而，对于胶体金试纸，由于缺少样本前处理的步骤，很难避免样本中残留药物对于抗药抗体检测率的影响。针对上述不足，急需一种使用方便、快速简便和灵敏度高的检测血清或血浆中阿达木单抗抗药抗体的检测试剂盒。

发明内容

为解决现有技术中缺乏快速、灵敏地检测血清或血浆中阿达木单抗抗药抗体的检测试剂，本发明提供了一种阿达木单抗抗药抗体的胶体金试剂盒及其制备方法和应用。

虽然现有技术中已有一些使用胶体金免疫检测试纸条或试剂盒来检测抗体的专利，但没有使用其来检测抗药物抗体的报道。抗药抗体的使用主要依赖于酶联免疫(ELISA)法、电化学发光免疫(ECL)法、放射免疫分析(RIA)等。而胶体金试纸条的问题是灵敏度相对较低，药物耐受差。另外，由于抗药物抗体的检测一般要求在检测实验室制定明确的临界值，因此，胶体金试纸条的检测更多地被用于样本的初筛，通常不建议作为最终的确诊依据。本领域中，未有本发明的样本稀释液A和B的试剂种类配合与pH值配合组合用于胶体金试纸条的先例。发明人意外地发现，在使用胶体金检测试纸条时，配以本发明的样本稀释液A和样本稀释液B组合，可以避免样本中残留药物对于抗药抗体检测率的影响。通过将待检测样本依次用样本稀释液A和B进行稀释，可以将待检测样本中与药物形成复合物的抗药抗体释放出来，从而降低残留药物的干扰，提高检测方法的药物耐受性。本发明的样本稀释液的共性在于，样本稀释液A可以将样本中可能存在的药物与抗药物抗体的复合物彻底解离，从而排除残留药物对于样本检测的干扰；样本稀释液B可以完全中和样本稀释液A，使样本重新恢复到适合于试剂条检测的中性环境中，从而不影响试纸条本身的灵敏度等性能。