[发明专利]一种碱性磷酸酶的提取方法在审
| 申请号： | 201910394507.2 | 申请日： | 2019-05-13 |
| 公开（公告）号： | CN110055237A | 公开（公告）日： | 2019-07-26 |
| 发明（设计）人： | 刘容旭;杨红;李志如;谢智鑫;王子欢;王宇聪;刘丹怡;杨宏博;王钰堡;韩建春 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C12N9/16 | 分类号： | C12N9/16 |
| 代理公司： | 哈尔滨龙科专利代理有限公司 23206 | 代理人： | 高媛 |
| 地址： | 150000 黑龙江*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肠粘膜 碱性磷酸酶 冻干 超临界CO2萃取 丙酮 除掉 粗粉 刮取 脂肪 硫酸铵 传统工艺 取上清液 杀菌作用 冻干机 进料釜 小肠 酶学 平皿 匀质 萃取 装入 新鲜 保留 | ||
1.一种碱性磷酸酶的提取方法，其特征在于：所述的方法具体步骤如下：
步骤一：取新鲜猪小肠或牛小肠，清洗干净，刮取肠粘膜；
步骤二：将刮取下来的肠粘膜均匀的涂在平皿中于冻干机中进行冻干，厚度为3~5mm，冻干后磨成粉，粒度不超过100目；
步骤三：将上述磨成粉的肠粘膜装入超临界CO2萃取设备的进料釜中，设置萃取压力为20MPa，分离压力为8MPa，萃取分离同时进行，总时间为1.5~2h，得到肠粘膜粗粉；
步骤四：按照1：0.8：0.05：0.47的体积比取步骤三得到的肠粘膜粗粉、水、硫酸铵和丙酮，然后向肠粘膜粗粉中加入水，匀质，调节pH为6.5，加入硫酸铵和丙酮，于4℃静置40min，9000r/min离心20min，取上清液额外再加入其1.07体积的丙酮，于4℃静置40min，9000r/min离心20min，取最终的沉淀物冻干即可。
2.根据权利要求1所述的一种碱性磷酸酶的提取方法，其特征在于：步骤二中，所述的冻干具体为：-40℃预冻40min后，-40℃运行120min，-35℃运行120min，-30℃运行360min，-25℃运行360min，-15℃运行360min，0℃运行120min，10℃运行120min，20℃运行360min。
3.根据权利要求1所述的一种碱性磷酸酶的提取方法，其特征在于：步骤四中，使用1M的NaOH来调节pH。
4.根据权利要求1所述的一种碱性磷酸酶的提取方法，其特征在于：步骤四中，所述的冻干具体为：-40℃预冻40min后，-40℃运行120min，-35℃运行120min，-30℃运行360min，-25℃运行360min，-15℃运行360min，0℃运行120min，10℃运行120min，20℃运行360min。
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