[发明专利]阿糖胞苷修饰的载甲氨喋呤脂质体的制备方法及应用有效

申请号：	201910393695.7	申请日：	2019-05-13
公开（公告）号：	CN110151698B	公开（公告）日：	2020-09-04
发明（设计）人：	费伟东;郑彩虹;秦佳乐;孙东黎;赵云春;郑晓玲;陈玥;吴晓东	申请（专利权）人：	浙江大学
主分类号：	A61K9/127	分类号：	A61K9/127;A61K47/26;A61K31/519;A61P35/00
代理公司：	杭州求是专利事务所有限公司 33200	代理人：	赵杭丽
地址：	310058 浙江***	国省代码：	浙江;33
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摘要：
搜索关键词：	阿糖胞苷修饰载甲氨喋呤脂质体制备方法应用
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【权利要求书】：

1.一种阿糖胞苷修饰的载甲氨喋呤脂质体的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：

（1）阿糖胞苷-PEG_2k-DSPE的合成：

（a）取DSPE-PEG_2k-COOH，溶于二甲基甲酰胺后摇匀，然后取阿糖胞苷，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、三乙胺、和1-羟基苯并三唑，依次加入到上述二甲基甲酰胺溶液体系，冰浴搅拌3-5 h；其中DSPE-PEG_2k-COOH，阿糖胞苷，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯，1-羟基苯并三唑与三乙胺的摩尔比为1:1.2:1.2:1.2:2；

（b）步骤（a）反应完成以后，将反应体系移至截留分子量为3500 Da的透析袋，在1000ml去离子水中透析72 h，每隔6 h换一次去离子水；

（c）透析结束后，将透析袋中的液体程序降温后冷冻干燥48 h，即得到阿糖胞苷-PEG_2k-DSPE；

（2）阿糖胞苷修饰载甲氨喋呤的脂质体的制备：

（a）溶解：取卵磷脂和胆固醇，溶于氯仿10 mL中，涡旋直至完全溶解；

（b）成膜: 将上述氯仿溶液加入至500 mL梨形烧瓶中，在旋转蒸发仪上减压蒸发，至瓶壁上形成一层浅黄色的薄膜，置于真空干燥箱内过夜，除去痕量残留氯仿；其中减压蒸发条件：水浴锅温度：45℃，压力：50 Pa，时间60 min；

（c）水化：先配置0.5 M NaOH溶液，用于溶解甲氨喋呤，然后用HCl溶液调pH至7-8；纯水定容配置成2 mg/ml的甲氨喋呤溶液，取2 mg/ml MTX溶液，加入至成膜后的梨形烧瓶中，40℃水化30 min，至黄色澄清溶液逐渐变黄色胶体状溶液；

（d）超声：将上述黄色胶体状溶液移至15 ml离心管，然后用细胞超声粉碎仪超声5min；

（e）高压匀质机过膜：在高压匀质机装上100 nm有机滤膜，将上述超声处理后的分散液匀质15 分钟，即得到粒径均一的阿糖胞苷修饰的载甲氨喋呤脂质体分散液；

（f）冷冻干燥：将上述制备完成的脂质体分散液加入冻干保护剂后程序降温，并冷冻干燥72 h得到阿糖胞苷修饰载甲氨喋呤的脂质体，所述冻干保护剂为5%甘露糖。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）的（d）中，超声粉碎仪超声功率：900 w，工作1s停1s。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）的（e）中，分散液匀质循环进行10次。

4.权利要求1所述方法在制备治疗滋养细胞引起的肿瘤的药物中的应用。