[发明专利]口蹄疫146S的定量检测方法及应用

说明书

本发明涉及生物制品质检技术领域，具体而言，提供了一种口蹄疫146S的定量检测方法及应用。本发明提供了的口蹄疫146S的定量检测方法，将待测样品先利用蔗糖密度梯度离心法检测，得到口蹄疫146S的初始含量A，再检测对应样品中粒径为28‑32nm的颗粒分布率B％，得到口蹄疫146S的最终含量为A×B％，对应样品为蔗糖密度梯度离心法中含有口蹄疫146S的蔗糖密度梯度层。该方法有效规避了细胞碎片、核酸、不完整的病毒颗粒、杂蛋白等对检测结果的干扰，真实反映完整病毒颗粒的含量并且更客观公正的反映完整病毒颗粒和免疫原性之间的关联性。

技术领域

本发明涉及生物制品质检技术领域，具体而言，涉及一种口蹄疫146S的定量检测方法及应用。

背景技术

口蹄疫(Foot-and-mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdisease virus，FMDV)引起偶蹄动物高度感染和造成严重经济损失的传染病,影响着全世界的畜牧业和国际贸易。世界范围内预防口蹄疫发生的有效方法是疫苗免疫，疫苗的生产过程中，各环节过程的控制都至关重要，其中准确定量完整的口蹄疫病毒离子(146S)尤为关键，146S抗原的含量直接决定了口蹄疫灭活疫苗的质量，因此准确，快速地检测出146S的含量具有重要的意义。

现有阶段针对口蹄疫完整病毒颗粒(146S)抗原的检测方法以蔗糖密度梯度离心法为主，该方法是将口蹄疫病毒样品置于蔗糖密度梯度中离心，在离心力的作用下，样品中的病毒粒子将沉降到相应的密度梯度层内，经紫外分光光度计259nm检测时有最高吸收峰，而在其他级份层没有吸收峰，根据仪器绘制的吸收峰图谱，通过计算吸收峰的面积得到146S抗原的含量。

该方法在实际检测过程存在一些不足，具体例如：

1检测结果不准，易受到干扰。抗原中可能含有的细胞碎片、核酸、不完整的病毒颗粒等均可对紫外分光吸收值产生影响，使得检测结果存在误差。

2检测结果与完整性、免疫原性相关性不佳。

鉴于上述两个存在偏差的因素，导致疫苗含量存在一定的出入，在分析疫苗产品质量与免疫效果上则会出现关联性不佳的可能。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种口蹄疫146S的定量检测方法，以缓解现有技术中口蹄疫146S含量检测不准确或操作繁琐并且成本高的技术问题。

本发明的第二目的在于提供上述口蹄疫146S的定量检测方法在评估口蹄疫疫苗的抗原含量中的应用。

本发明的第三目的在于提供上述口蹄疫146S的定量检测方法在制备口蹄疫疫苗中的应用。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种口蹄疫146S的定量检测方法，待测样品先利用蔗糖密度梯度离心法检测，得到口蹄疫146S的初始含量A，再检测对应样品中粒径为28-32nm的颗粒分布率B％，得到口蹄疫146S的最终含量为A×B％；

所述对应样品为蔗糖密度梯度离心法中含有口蹄疫146S的蔗糖密度梯度层。

进一步地，所述对应样品通过如下方法得到：紫外分光光度计OD₂₅₉检测，根据出峰时间确定蔗糖浓度并且根据出峰位置收集样品，得到所述对应样品。

进一步地，所述蔗糖密度梯度离心法包括如下步骤：将待测样品进行蔗糖密度梯度离心，对沉降到相应密度梯度层的样品进行紫外分光光度计OD₂₅₉检测，计算吸收峰面积，得到口蹄疫146S的初始含量A。

进一步地，所述颗粒分布率B％通过纳米粒径分布仪检测得到。

进一步地，检测对应样品的粘度和折光率后再进行纳米粒径分析仪检测。