[发明专利]检测副溶血弧菌的RT-qsCPA引物及其试剂盒和方法

权利要求书

1.一种副溶血弧菌检测试剂盒，其特征在于，包括如下RT-qsCPA引物：

外引物4s：序列如SEQ ID NO：1，

外引物5a：序列如SEQ ID NO：2，

内引物3a：序列如SEQ ID NO：3，

内引物2a：序列如SEQ ID NO：4，和

交叉引物CP：序列如SEQ ID NO：5；

还包括dNTPs、甜菜碱、MgSO₄、核酸染料、缓冲液、Bst DNA聚合酶、SiO₂及水；

所述核酸染料为SYBR Green I。

2.一种副溶血弧菌的非诊断目的的检测方法，其特征在于，采用权利要求1所述试剂盒对副溶血弧菌的DNA进行扩增。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法的反应体系如下：

交叉引物CP 0.4~0.6μM

内引物3a 0.3~0.5μM

内引物2a 0.3~0.5μM

外引物4s 0.04~0.06μM

外引物5a 0.04~0.06μM

dNTPs 0.7~0.9mM

甜菜碱 0.4~0.6M

MgSO₄ 5~7mM

核酸染料 0.5×

缓冲液 1×

Bst DNA聚合酶 7~9U

SiO₂ 0.1~0.3mg/mL

模板DNA或待测样本 1~3μL

水 补足至20μL。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法的反应体系如下：

交叉引物CP 0.5μM

内引物3a 0.4μM

内引物2a 0.4μM

外引物4s 0.05μM

外引物5a 0.05μM

dNTPs 0.8mM

甜菜碱 0.5M

MgSO₄ 6mM

核酸染料 0.5×

缓冲液 1×

Bst DNA聚合酶 8U

SiO₂ 0.2mg/mL

模板DNA或待测样本 1μL

水 补足至20μL。

5.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法的反应条件为60~65℃下反应0.5~1.5 h。

6.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法的判断方法为：

观察实时荧光定量检测的扩增曲线，没有扩增曲线，则副溶血弧菌特异基因没有扩增；

有扩增曲线，则副溶血弧菌特异基因有扩增。