[发明专利]一种西伯利亚杏早晚花花期的早期鉴别引物、筛选方法和鉴别方法

说明书

本发明公开一种西伯利亚杏早晚花花期的早期鉴别引物、筛选方法和鉴别方法，鉴别引物为：正向引物F的序列为GTAGTCAAGGTCGCTAAGGC，反向引物R的序列为AGTGATTCCGTGTTCTTCGC。利用鉴别引物对待测西伯利亚杏进行基因组DNA扩增，将得到的PCR产物回收进行一代测序，将得到的一代序列结构与参考序列进行比对，若在371‑377位置出现ACCATAG的缺失，595和613位置为A，则为晚花型西伯利亚杏，若在371‑377位置ACCATAG不缺失，595和613位置为G，则为早花型西伯利亚杏，可成功的鉴别西伯利亚杏的花期，准确率可达100％。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域。具体地说是一种西伯利亚杏早晚花花期的早期鉴别引物、筛选方法和鉴别方法。

背景技术

西伯利亚杏(Amaniaca Sibirica(L.)Lam)为蔷薇科(Rosacesae)李属(AemeniacaMill.)植物，是一种集生态价值和经济价值于一身的优良生态兼经济树种。其抗寒性强，冬季可耐-50℃的低温，抗旱，怕涝。在中国，其资源主要分布在内蒙古大青山、宁夏的贺兰山区、甘肃的腾格里沙漠边缘地区及辽松平原的西侧，有良好的固沙作用。西伯利亚的特点：种仁小、饱满、果仁中脂肪、蛋白质及苦杏仁苷含量丰富，杏仁可以入药，也可以榨油或加工成食品与饮料，是中国传统的出口物资之一。西伯利亚杏在内蒙地区4月初到4月中下旬开花，开花早，单花花期2～5d，整株花期8～11d，花期短，结果早。因此，早春的风和低温会影响蜜蜂的活动，从而影响授粉，霜冻也可以减少芽、花和幼果的数量。因此，杏的晚花性状可以作为确保产量的重要育种目标。亟待开发一种早期检测西伯利亚杏花期的分子标记，可为西伯利亚杏在分子鉴定和辅助育种等方面提供有力的技术支持。

前期，在内蒙古自治区和林格尔县的良种繁育中心，经过2012-今的连续7年筛选，得到花期稳定，连年晚于普通西伯利亚杏盛花期7-15d的45株晚花西伯利亚杏，其45株晚花西伯利亚杏近3年花期情况如下表。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种西伯利亚杏早晚花花期的早期鉴别引物、筛选方法和鉴别方法。

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

一种西伯利亚杏早晚花花期的早期鉴别引物，鉴别引物为一对；正向引物F的核苷酸序列为GTAGTCAAGGTCGCTAAGGC，反向引物R的核苷酸序列为AGTGATTCCGTGTTCTTCGC。

一种西伯利亚杏早晚花花期的早期鉴别引物的筛选方法，预测方法包括如下步骤：

(1-1)以西伯利亚杏F106基因组数据为模板，做全基因组关联分析，得到与西伯利亚杏花期早-晚花花期相关的候选区域，使用Primer3在线预测鉴别引物对；引物对的PCR扩增产物长度为958bp；

(1-2)鉴别引物的核苷酸序列为：

正向引物F的序列为GTAGTCAAGGTCGCTAAGGC，

反向引物R的序列为AGTGATTCCGTGTTCTTCGC；

(1-3)引物对的设计，在chr6染色体上，存在与西伯利亚杏早-晚花花期相关的序列：在PCR扩增序列的371-377位置出现ACCATAG的缺失，595位置和613位置为A，则为晚花型西伯利亚杏；若在PCR扩增序列的371-377位置ACCATAG不缺失，595和613位置为G，则为早花型西伯利亚杏。

上述西伯利亚杏早晚花花期的早期鉴别引物的筛选方法，实验方法包括如下步骤：