[发明专利]一种杜仲提取物中7个入血成分的浓度测定方法

权利要求书

1.一种杜仲提取物中7个入血成分的浓度测定方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤(1)：用京尼平苷酸、原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷和松脂醇单葡萄糖苷配制7个成分的标准对照液，用葛根素配制内标溶液，然后建立血浆样品的处理方法，并采用高液相色谱-电喷雾-串联质谱HPLC-ESI-MS/MS联用仪对7个成分的色谱条件和质谱条件进行优化，确定7个成分优化的色谱条件如下：色谱柱：Waters BEH C18，2.1mm×100mm，1.7μm，保护柱：Waters Van Guard BEH C18，2.1mm×5mm，1.7μm，流速：0.30mL·min^-1，柱温：40℃，流动相：0.1％甲酸水A，0.1％甲酸乙腈B，梯度洗脱，进样体积为1μL，并且确定7个成分优化的质谱条件；

步骤(2)：建立同时测定杜仲提取物中7个入血成分的浓度的HPLC-ESI-MS/MS方法，并对该方法进行验证，包括专属性考察、标准曲线的制备、准确度和精密度、提取回收率、基质效应以及稳定性考察；最后，将上述方法用于测定模型大鼠以一定剂量灌胃杜仲提取物后15个不同时间点所得血浆中的7个入血成分的浓度。

2.根据权利要求1所述的杜仲提取物中7个入血成分的浓度测定方法，其特征在于：步骤(1)所述优化的梯度洗脱，具体洗脱梯度如下：0～0.5min，90％～90％(A)；0.5～7.5min，90％～75％(A)；7～8min，75％～65％(A)；8～9min，65％～10％(A)；9～9.5min，10％～10％(A)；9.5～10.5min，10％～90％(A)；10.5～13min，90％～90％(A)。

3.根据权利要求1所述的杜仲提取物中7个入血成分的浓度测定方法，其特征在于：步骤(1)所述优化的质谱条件，具体如下：采用电喷雾电离源(ESI)，离子化电压(IS)：4500V，离子源温度(TEM)：550℃，气帘气(CUR，N₂)：40psi，喷撞气(CAD，N₂)：Medium，喷雾气(GS1，N₂)：55psi，辅助加热气(GS2，N₂)：55psi，扫描方式为多反应离子监测(MRM)；离子对如下：京尼平苷酸m/z373.20→123.00、原儿茶酸m/z 152.90→109.10、新绿原酸m/z353.17→191.04、绿原酸m/z 353.19→191.03、隐绿原酸m/z 353.21→173.10、松脂醇二葡萄糖苷m/z 681.00→357.20、松脂醇单葡萄糖苷m/z 519.2→357.20、葛根素(内标)417.10→267.10；DP电压分别为：-40v、-60v、-51v、-70v、-80v、-70v、-76v、110v；EP电压分别为：-6v、-6v、-7v、-7v、-5v、-4v、-8v、7v；CE电压分别为：-26v、-21v、-19v、-24v、-21v、-35v、-25v、35v；CXP电压分别为：-6v、-9v、-8v、-7v、-10v、-23v、-31v、6v。

4.根据权利要求1所述的杜仲提取物中7个入血成分的浓度测定方法，其特征在于：步骤(2)所述的模型大鼠是指自发性高血压大鼠。

5.根据权利要求1所述的杜仲提取物中7个入血成分的浓度测定方法，其特征在于：步骤(2)所述的一定剂量是指5～10g/kg。