[发明专利]一种从商陆中提取纯化商陆抗病毒蛋白的方法在审
| 申请号： | 201910384278.6 | 申请日： | 2019-05-09 |
| 公开（公告）号： | CN110016470A | 公开（公告）日： | 2019-07-16 |
| 发明（设计）人： | 张春发;黄超;秦人胜;邓柳红;高海波;陈吉良;王胜 | 申请（专利权）人： | 江苏森瑞谱生物制药有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/24 | 分类号： | C12N9/24 |
| 代理公司： | 海口翔翔专利事务有限公司 46001 | 代理人： | 张耀婷;莫臻 |
| 地址： | 225300 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 商陆抗病毒蛋白 商陆 阳离子交换层析 阴离子交换层析 提取纯化 粗蛋白 抗病毒 真空冷冻干燥 提取总蛋白 析出 超滤浓缩 工艺路径 临床应用 硫酸铵盐 医药领域 标准品 对照品 高纯度 缓冲液 洗脱 盐析 叶片 溶解 | ||
1.一种从商陆中提取纯化商陆抗病毒蛋白的方法，其特征在于，具体步骤如下：
1)取商陆叶片，采用1:1～3比例加入蛋白提取缓冲液匀浆提取总蛋白，取上清，30～45％硫酸铵盐析离心去除大部分杂质后，再采用80～95％的硫酸铵盐析出得到商陆抗病毒粗蛋白；
2)将商陆抗病毒粗蛋白溶解于PH为7.2～7.7的Tris-HCl缓冲液，脱盐过滤后，先采用阴离子交换层析纯化，洗脱后再采用阳离子交换层析进一步纯化，洗脱得到商陆抗病毒蛋白溶液；
3)商陆抗病毒蛋白溶液采用超滤浓缩，真空冷冻干燥得到纯度大于或等于99％的商陆抗病毒蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的商陆是商陆Phytolacca acinosaRoxb或垂序商陆Phytolacca americana L.。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述阴离子交换层析采用的阴离子交换层析柱填料是二乙氨乙基纤维素或二乙氨乙基琼脂糖凝胶；洗脱液为10～20mmol/L Tris-HCL，PH7.2～7.7。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述阳离子交换层析采用的阳离子交换层析柱填料是羧甲基纤维素或羧甲基琼脂糖凝胶。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述阳离子交换层析采用不连续的阶段洗脱方式：先用低浓度缓冲液洗脱非特异性吸附，低浓度缓冲液为20～45mmol/L NaCl的磷酸盐缓冲液，再用高浓度缓冲液洗脱商陆抗病毒蛋白，高浓度缓冲液为60～90mmol NaCl的磷酸缓冲液。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的商陆抗病毒蛋白分子量为29～30KD，等电点为8。
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