[发明专利]一种大叶杨组培快繁方法

说明书

本发明提供了一种大叶杨的组培快繁方法，属于植物组织培养技术领域。本发明先将大叶杨枝条依次冷藏、浸泡和水培，得到8～10cm长的幼嫩小枝；然后对所述幼嫩小枝进行无菌处理，得到无菌叶片；将所述无菌叶片分割成小块，接种到不定芽诱导培养基上诱导培养，得到不定芽；再将所述不定芽分割成带有一个腋芽的茎段，每个茎段分别接种于生根培养基上生根培养，得到生根苗；最后将所述生根苗炼苗后移栽，得到大叶杨种苗。本发明提供的大叶杨组培快繁方法步骤简单，周期短，叶片年增殖数可达到81株，能有效实现大叶杨的组培快繁。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种大叶杨组培快繁方法。

背景技术

大叶杨(学名：Populus lasiocarpa Oliv.)是杨柳科杨属的多年生木本植物，为我国特有的乡土树种，原产于华中地区，仅在湖北、陕西、四川、贵州和云南省有野生种分布，国外无野生种群分布。又因分布于鄂西北、鄂西南最多而又被称为鄂西大叶杨，俗名为水冬瓜，属大叶杨派中的一种。大叶杨适宜海拔600～2800m，喜湿润温凉气候，有一定的耐寒能力，具有较高的生态价值，其高山地区的适应性是山地杨树育种的优良基因资源。其木材白色，轻软，结构细，为造纸、板料、家具等优良用材，是一种优良的乡土阔叶树种。但是，迄今大叶杨仍处于野生状态，分布零散，采种困难，且实生苗遗传分化现象严重，生产中种子育苗应用较少，未得到有效保护与利用。因此，开展大叶杨种质资源的保存与利用研究具有重要意义。

已有研究显示，大叶杨扦插成活率极低，不同生根剂处理的枝插成活率均为零，根插成活率亦低于15％。嫁接成活率相对较高，但对砧木要求特殊，目前仅发现山地杨与其具有较高的亲和性。这些都对大叶杨种质资源的保存造成一定困难。

发明内容

有鉴于背景技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种大叶杨组培快繁方法，建立大叶杨高效组培快繁体系，以期为解决生产中大叶杨的育苗问题提供参考。

本发明提供的技术方案如下：

一种大叶杨组培快繁方法，包括以下步骤：

(1)将大叶杨枝条依次冷藏、浸泡和水培，得到8～10cm的幼嫩小枝；

(2)对所述幼嫩小枝进行无菌处理，得到无菌叶片；

(3)将所述无菌叶片分割成0.5～1.5cm×0.5～1.5cm的小块，接种到不定芽诱导培养基上诱导培养，得到不定芽；

所述不定芽诱导培养基的组成包括：以1/2MS培养基为基准，每升1/2MS培养基中还包括6-BA0.8～1.2mg、NAA0.08～0.12mg、琼脂4～8g和蔗糖25～35g，所述不定芽诱导培养基的pH值为5.5～6；

(4)将所述不定芽分割成带有一个腋芽的茎段，每个茎段分别接种于生根培养基上生根培养，得到生根苗；

(5)将所述生根苗炼苗后移栽，得到大叶杨种苗。

优选的，步骤(1)所述冷藏的温度为2～6℃，冷藏的时间为8～12d。

优选的，步骤(1)所述浸泡的温度为10～30℃，浸泡的时间为36～60h。

优选的，步骤(2)所述无菌处理依次包括洗洁精溶液浸泡、清水冲洗、酒精溶液浸泡和次氯酸钠溶液浸泡；所述洗洁精溶液的稀释倍率为200～500，洗洁精溶液浸泡的时间为5～15min所述清水冲洗的时间为40～80min；所述酒精溶液的体积浓度为60～80％，酒精溶液浸泡的时间为20～40s；所述次氯酸钠溶液的质量浓度为3～7％，次氯酸钠溶液浸泡的时间为4～7min。

优选的，所述清水冲洗、酒精溶液浸泡或者次氯酸钠溶液浸泡后，还包括无菌蒸馏水润洗或冲洗。