[发明专利]一种采用核黄素介导胞外多聚物鞘氨醇单胞菌原位修复铀污染地下水的方法

权利要求书

1.一种采用核黄素介导胞外多聚物鞘氨醇单胞菌（Sphingomonas sanxanigenens）原位修复铀污染地下水的方法，其特征在于，具体步骤如下：

（1）培养胞外多聚物鞘氨醇单胞菌；

（2）建立沉积物-地下水微模型；

（3）添加核黄素至步骤（2）建立的微模型中；

（4）向步骤（3）添加了核黄素的微模型中按2%的接种量接种步骤（1）所培养的胞外多聚物鞘氨醇单胞菌；

（5）将步骤（4）添加了核黄素和接种了胞外多聚物鞘氨醇单胞菌的微模型在恒温厌氧条件下避光静置一段时间，

（6）测定地下水中铀浓度，

所述培养胞外多聚物鞘氨醇单胞菌具体方法如下：

1.1）购买胞外多聚物鞘氨醇单胞菌；

1.2）按10.0 g蛋白胨，5.0 g酵母提取物，1.0 g葡萄糖，1.0 L蒸馏水的配比方法配置007培养基，用1 mol/L HCl和1 mol/L NaOH溶液调节培养基溶液的pH值至6.8-7.0之间，并于121 ºC高压灭菌锅中灭菌30 min，备用；

1.3）取0.3-0.5 mL的007液体培养基，滴入胞外多聚物鞘氨醇单胞菌的安瓿内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状，吸取全部菌悬液，转移到装有15 mL 007液体培养基的试管中，再将其置于转速为180 rpm的摇床，在30 ºC下培养10-12 h，然后再将培养好的菌液按2%的接种量接种至007液体培养基中，置于转速为180 rpm的摇床，在30 ºC下培养10-12 h，如此重复培养3次后，即得到用于实验的胞外多聚物鞘氨醇单胞菌；

所述沉积物-地下水微模型的建立具体方法如下：

2.1）加入含铀含铁的沉积物0.8 g，铀含量为0.8 mg/L地下水400 mL以及007培养基400 mL至瓶中，摇匀；

2.2）用1M HCl和1M NaOH溶液调节混合悬浊液的pH值至6.0±0.05范围内。

2.根据权利要求1所述的一种采用核黄素介导胞外多聚物鞘氨醇单胞菌原位修复铀污染地下水的方法，其特征在于，所述培养的胞外多聚物鞘氨醇单胞菌的细胞浓度为6×10⁶细胞/mL。

3.根据权利要求1所述的一种采用核黄素介导胞外多聚物鞘氨醇单胞菌原位修复铀污染地下水的方法，其特征在于，所述添加核黄素至建立的微模型中具体方法如下：

3.1）将0.032 - 0.064 g核黄素分别加入到步骤（2）建立的沉积物-地下水微模型的瓶中，并于121 ºC的高压灭菌锅中灭菌30 min，冷却；

3.2）向上述瓶中通入含量为95% N₂和5% H₂的混合气体3 h以上。

4.根据权利要求1所述的一种采用核黄素介导胞外多聚物鞘氨醇单胞菌原位修复铀污染地下水的方法，其特征在于，所述步骤（4）具体过程如下：

4.1）向上述步骤（3）的瓶中按2 %的菌液接种量接种步骤（1）中培养的胞外多聚物鞘氨醇单胞菌，加塞密闭；

4.2）再向瓶中缓慢通入含量为95% N₂和5% H₂的混合气体5min，加塞密闭。

5.根据权利要求1所述的一种采用核黄素介导胞外多聚物鞘氨醇单胞菌原位修复铀污染地下水的方法，其特征在于，所述步骤（5）具体方法如下：

将步骤（4）中建立的微模型置于30 ºC恒温厌氧环境下，静置培养40-51天。

6.根据权利要求1所述的一种采用核黄素介导胞外多聚物鞘氨醇单胞菌原位修复铀污染地下水的方法，其特征在于，所述步骤（6）具体方法如下：

在厌氧环境中对微模型中的地下水进行取样，所取的水样加2%的HNO₃进行消解过滤后，采用ICP-MS对样品的铀浓度进行检测。