[发明专利]分离出的DNA分子、编码蛋白质分子及其应用

权利要求书

1.一种分离出的DNA分子，其特征在于，为从水稻中克隆出的基因，记为OsARF25，全长6057bp，其中开放阅读框为2700bp，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

2.一种如权利要求1所述的基因OsARF25编码的蛋白质分子，其特征在于，该序列编码899个氨基酸残基，氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

3.一种用于调取获得水稻样品中基因OsARF25的引物序列，其特征在于，序列如SEQ IDNO.3和SEQ ID NO.4所示。

4.一种检测水稻基因OsARF25 mRNA表达模式的方法，其特征在于，利用权利要求1所述基因OsARF25的核苷酸序列作为设计探针引物的保守区段，调取其序列的引物序列见SEQID NO.5和SEQ ID NO.6，对水稻cDNA样品进行Real-time PCR，然后检测该基因在茎、叶、根中的表达；样品为水稻的RNA经过逆转录后所得cDNA；其步骤如下：

(1)提取水稻不同器官的总RNA；

(2)利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6，进行Real-time PCR检测。

5.一种基因OsARF25表达含量变化的方法，其特征在于，检测水稻在干旱、高盐胁迫以及植物激素处理后表达含量的变化，具体步骤为：将水稻进行干旱、高盐胁迫以及植物激素处理后，提取水稻的总RNA；利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQ IDNO.5和SEQ ID NO.6，进行Real-time PCR检测。

6.根据权利要求5所述的基因OsARF25表达含量变化的方法，其特征在于，其步骤如下：

(1)将两周大的水稻苗置于150mM氯化钠溶液中，28℃培养高盐胁迫处理0、2、4、8、以及12h；置于含20％PEG溶液中以进行干旱处理0、2、4、8以及12h；置于10μM IAA、6-BA、KT、ABA、GA中，以进行激素处理8h；

(2)提取前述个处理的水稻苗的叶和根中的总RNA；

(3)利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，根据SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6设计引物，根据SEQ ID NO.1，进行Real-time PCR检测。

7.一种检测水稻Tilling突变体中基因OsARF25表达含量变化的方法，其特征在于，提取突变体和野生型对照组水稻总DNA，利用引物SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8，进行PCR检测。

8.根据权利要求7所述的检测水稻Tilling突变体中基因OsARF25表达含量变化的方法，其特征在于，具体步骤为：

(1)突变体株系与野生型的种子浸泡在水中24h，让种子充分吸涨。随后将种子玻璃培养皿内，放在水稻恒温培养箱内37℃催芽至露白，每天换水，防止长霉。选取萌发一致的种子，将其转移至种子架上，置于基础营养液中，28℃培养箱培养。

(2)分别提取突变体以及野生型对照组中的总DNA，利用引物进行PCR检。

9.如权利要求1所述的水稻基因OsARF25在植物品种改良中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

(1)突变体株系与野生型的种子浸泡在水中24h，让种子充分吸涨。放于培养皿内，恒温培养箱内37℃催芽至露白，每天换水，防止长霉；

(2)将催芽后的种子均匀地散在苗床上，表面不能积水，种子播撒后，用手抹平，让种子陷入泥中，不应太深；

(3)育苗3-4周后，三叶苗，根系发达方可移苗。过早会造成根部损伤，后期发育不良。移苗后1-2周可按每颗苗0.5g尿素少量施肥。浇水一般提前将水放在温室内1天温热后再浇；

(4)生长期测定突变体与野生型的根长和冠根数；成熟期测量突变体与野生型水稻的籽粒饱满度，并统计籽粒数、千粒重与结实率。