[发明专利]一种快速检测猪流行性腹泻病毒的方法

说明书

本发明涉及到一种快速检测猪流行性腹泻病毒的方法，本发明的一种快速检测猪流行性腹泻病毒的方法，采用在Vero传代细胞生长的PEDV—G1株，所述的Vero传代细胞的制备为：Vero细胞长成单层后，弃去营养液，加入病毒液，室温感作1.5h；然后加入维持液，放到37.5℃培养；病毒在细胞生长60h有明显病变时收取毒液，冻融，离心去细胞碎片，置‑70℃以下冻存，所述的检测方法为，取猪肠粘膜深层压片，经丙酮固定后，荧光染色，检测PEDV—G1株。本发明提供的检测方法具备高效准确的特点。

技术领域

本发明涉及到一种快速检测猪流行性腹泻病毒的方法。

背景技术

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的一种接触性肠道传染病，其特征为呕吐、腹泻、脱水。临床变化和症状与猪传染性胃肠极为相似。

猪流行腹泻病毒(PEDV),属于冠状病毒科冠状病毒属。到目前为止，还没有发现本病毒有不同的血清型。本病毒对乙醚、氯仿敏感。病毒粒子呈现多性性，倾向圆形，外有囊膜。从患病仔猪的肠灌液中浓缩和纯化的病毒不能凝集家兔、小鼠、猪、豚鼠、绵羊、牛、马、雏鸡、和人的红细胞。

本病只发生于猪，各种年龄的猪都能感染发病。哺乳猪、架子猪或肥育猪的发病率很高，尤以哺乳猪受害最为严重，母猪发病率变动很大，约为15—90％。病猪是主要传染源。病毒存在于肠绒毛上皮细胞和肠系膜淋巴结，随粪便排出后，污染环境、饲料、饮水、交通工具及用具等而传染。主要感染途径是消化道。如果一个猪场陆续有不少窝仔猪出生或断奶，病毒会不断感染失去母源抗体的断奶仔猪，使本病呈地方流行性，在这种繁殖场内，猪流行性腹泻可造成5—8周龄仔猪的断奶期顽固性腹泻。本病多发生于寒冷季节。

猪流行性腹泻发病机理为，病毒经口和鼻感染后，直接进入小肠。通过免疫荧光和电子显微镜检查，病毒的复制是在小肠和结肠绒毛上皮细胞浆中进行。其他脏器内未发现病毒增殖。由于病毒增殖首先造成细胞,器的损伤，继而出现细细胞功能障碍。肠绒毛萎缩，造成了吸收表面积的减少，小肠黏膜碱性磷酸酶含量显著减少进而引起营养物质吸收障碍，这是引起腹泻的主要原因，属于渗透性腹泻。严重腹泻引起脱水，是导致病猪死亡的主要原因。

猪流行性腹泻潜伏期一般为5—8天，人工感染潜伏期为8—24小时。主要的临床症状为水样腹泻，或者在腹泻之间有呕吐。呕吐多发生于吃食或吃奶后。症状的轻重随年龄的大小而有差异，年龄越小，症状越重。一周龄内新生仔猪发生腹泻后3—4天，呈现严重脱水而死亡，死亡率可达50％，最高的死亡率达100％。病猪体温正常或稍高，精神沉郁，食欲减退或废绝。断奶猪、母猪常呈精神萎顿、厌食和持续性腹泻大约一周，并逐渐恢复正常。少数猪恢复后生长发育不良。肥育猪在同圈饲养感染后都发生腹泻，一周后康复，死亡率1％--3％。

1973年起，国内在研究猪传染性胃肠炎过程中，先后用猪体分离法分离到猪流行性腹泻华、川、吉等毒株。1980年，我国成功地用猪小肠器官培养物培养传代这些病毒株。1991年，广州动植物检疫局李树根等从广东地区表现有流行性腹泻症状的病猪采集的病料分离出来的PED病毒先后适应于Vero、Pk15、和ST传代细胞生长繁殖。

目前国内尚未有更先进的可靠的快速检测猪流行性腹泻病毒的方法。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种快速检测猪流行性腹泻病毒的方法。

本发明的一种快速检测猪流行性腹泻病毒的方法，采用在Vero传代细胞生长的PEDV—G1株。

如上所述的一种快速检测猪流行性腹泻病毒的方法，更进一步说明为，所述的Vero传代细胞的制备为：Vero细胞长成单层后，弃去营养液，加入病毒液，室温感作1.5h；然后加入维持液，放到37.5℃培养；病毒在细胞生长60h有明显病变时收取毒液，冻融，离心去细胞碎片，置-70℃以下冻存。