[发明专利]以高分辨率熔解曲线为基础的三带喙库蚊鉴定试剂盒及其鉴定方法有效
| 申请号： | 201910373361.3 | 申请日： | 2019-05-07 |
| 公开（公告）号： | CN110029176B | 公开（公告）日： | 2023-01-03 |
| 发明（设计）人： | 滕新栋;陈晓光;程晓兰;侯伟;梁洁;张瑾;郑健;张涛;姜华;刘海江;朱可;徐翮飞;张娟;郭宁;顾长美 | 申请（专利权）人： | 青岛国际旅行卫生保健中心（青岛海关口岸门诊部） |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京知企鸿蒙专利代理事务所(普通合伙) 11692 | 代理人： | 刘帅帅 |
| 地址： | 266071 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 高分辨率 熔解 曲线 基础 三带喙库蚊 鉴定 试剂盒 及其 方法 | ||
1.一种以高分辨率熔解曲线为基础的三带喙库蚊COIII基因鉴定方法，其特征是，包括如下步骤：
1）高分辨率熔解曲线模板三带喙库蚊基因组DNA的制备
使用电动匀浆器低温研磨三带喙库蚊组织；使用TaKaRa MiniBEST UniversalGenomic DNA Extraction Kit Ver.5.0试剂盒，参照试剂盒说明提取三带喙库蚊基因组DNA；
2）高分辨率熔解曲线反应体系：
30μL反应体系包括：FastStart Taq DNA聚合酶0.5μL，DNA模板2μL，dNTP混合液2μL，ResoLight饱和荧光染料1μL，COIII-F引物1μL，COIII-R引物1μL，反应缓冲液3μL，25mMMgCl2 3.6μL，ddH2O 15.9μL；
COIII-F和COIII-R序列如下：
COIII-F：5’- CGATGAGGAATAATTTTATT -3’；
COIII-R：5’- CAGTAAAGAATAAACTTTGAG -3’；
3）高分辨率熔解曲线反应程序：
94℃预变性5min；94℃变性30s，52℃退火30s，72℃延伸1min，共30个循环；72℃延伸5min；
PCR结束后直接运行高分辨率熔解曲线，95℃变性1min，40℃降温1min，65-95℃连续升温，每次升温1℃，收集25个荧光信号；40℃冷却10s，使用LightCycler® 480 GeneScanning Software 软件分析高分辨率熔解曲线；横坐标为温度，纵坐标为相对荧光强度，其中有波动的曲线为三带喙库蚊，直线的曲线为对照蚊种。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于青岛国际旅行卫生保健中心（青岛海关口岸门诊部），未经青岛国际旅行卫生保健中心（青岛海关口岸门诊部）许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910373361.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
