[发明专利]利用高分辨率熔解曲线法检测左乙拉西坦用药相关基因SCN1A多态性的试剂盒及其方法

说明书

本发明公开了一种利用高分辨率熔解曲线法检测左乙拉西坦用药相关基因SCN1A多态性的试剂盒，其特征在于，包括所述SCN1A基因的多态性位点rs2298771的检测引物，所述引物的核苷酸序列如下所示：SCN1A上游引物：5′‑CAA GAA AGA CAG TTG TAT GTC CAA TC‑3′；SCN1A下游引物：5′‑ACA CTG CTG CCA GTT CCT ATA CC‑3′；其他部分为HRM分析试剂盒的常规试剂。本发明还公开了一种利用高分辨率熔解曲线法检测左乙拉西坦用药相关基因SCN1A多态性的试剂盒的检测方法。本发明的试剂盒适用于对左乙拉西坦个体化用药基因进行快速检测，可广泛应用于临床上左乙拉西坦个体化用药方案制定的基因检测。

技术领域

本发明属于基因检测领域，具体涉及一种利用高分辨率熔解曲线法检测左乙拉西坦用药相关基因SCN1A多态性的试剂盒及其检测方法。

背景技术

左乙拉西坦(Levetiracetam，Lev，商品名：Keppra,开浦兰)是1999年经美国FDA批准用于成人癫痫部分性发作。2005年其口服片剂和溶液剂被批准用于4岁及以上儿童部分性发作的辅助治疗。研究发现脑内突出囊泡蛋白SV2A是抗癫痫药LEV作用位点。即LEV结合修饰SV2蛋白的功能以提供抗惊厥作用。

在广泛的临床试验中证明用LEV辅助治疗在控制成人难治性部分癫痫发作中既有效又被很好地耐受。SCN1A基因rs2298771位点突变导致LEV疗效差异。G等位基因携带者发作完全控制率显著低于AA型个体，G等位基因为影响疗效的风险因子。

由此可见，对SCN1A基因rs2298771位点进行分型检测可预测患者对左乙拉西坦的反应性，为临床医生给癫痫患者初次治疗制定药物治疗方案提供依据。

因此，SCN1A基因rs2298771位点进行分型检测可预测患者对左乙拉西坦的反应性，为临床医生给癫痫患者初次治疗制定药物治疗方案提供依据。开发快速、高效、准确、便捷、经济的检测SCN1A基因多态性的试剂盒将为左乙拉西坦的临床个体化治疗起到积极的推动作用。

高分辨率熔解曲线(high-resolution melting，HRM)是一种基于单核苷酸熔解温度不同而形成不同形态熔解曲线的基因分析新技术，拥有高敏感性，成本低、通量高、速度快、结果准确、不受检测位点的局限，闭管操作等特点，符合临床大样本检测要求。

发明内容

为了克服现有技术的上述缺陷，本发明的目的之一在于提供一种利用高分辨率熔解曲线法检测左乙拉西坦用药相关基因SCN1A多态性的试剂盒，以实现快速、简便、准确、高效、实用、经济的检测左乙拉西坦个体化用药相关基因SNP。

本发明的目的之二在于一种利用高分辨率熔解曲线法检测左乙拉西坦用药相关基因SCN1A多态性的试剂盒的检测方法。

为了实现本发明的目的之一，所采用的技术方案是：

一种利用高分辨率熔解曲线法检测左乙拉西坦用药相关基因SCN1A多态性的试剂盒，包括所述SCN1A基因的多态性位点rs2298771的检测引物，所述引物的核苷酸序列如下所示：

SCN1A上游引物：5′-CAA GAA AGA CAG TTG TAT GTC CAA TC-3′；

SCN1A下游引物：5′-ACA CTG CTG CCA GTT CCT ATA CC-3′；其他部分为HRM分析试剂盒的常规试剂。

为了实现本发明的目的之二，所采用的技术方案是：

一种利用高分辨率熔解曲线法检测左乙拉西坦用药相关基因SCN1A多态性的试剂盒的检测方法，包括如下步骤：

步骤一，DNA提取步骤：将样本中的DNA提取后保存至冰箱待用

步骤二，高分辨率熔解曲线反应步骤：