[发明专利]一种含有不稳定结构域的CAR-T细胞及其制备方法和调节CAR-T细胞功能方法在审
| 申请号： | 201910371296.0 | 申请日： | 2019-05-06 |
| 公开（公告）号： | CN110079504A | 公开（公告）日： | 2019-08-02 |
| 发明（设计）人： | 张文;孙娇;刘江;唐东起 | 申请（专利权）人： | 山东大学第二医院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/62;C12N15/867 |
| 代理公司： | 山东济南齐鲁科技专利事务所有限公司 37108 | 代理人： | 张娟 |
| 地址： | 250000 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 稳定结构 制备 编码基因 融合蛋白 融合基因 细胞膜 小分子化合物 终止密码子 细胞功能 产业化 去除 细胞 | ||
1.一种含有不稳定结构域的CAR-T细胞，其特征在于：在CAR-T细胞中含有不稳定结构域的编码基因；并且去除终止密码子的CAR基因的3’端与不稳定结构域的编码基因直接连接构成融合基因，并在CAR-T细胞中表达上述融合基因编码的融合蛋白，该融合蛋白位于细胞膜上。
2.根据权利要求1所述的一种含有不稳定结构域的CAR-T细胞，其特征在于：所述的不稳定结构域为二氢叶酸还原酶DHFR的不稳定结构域、FKBP12蛋白的不稳定结构域或基于雌激素受体配体结合结构域发展的不稳定结构域ERLBP。
3.权利要求1所述的含有不稳定结构域的CAR-T细胞的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
①将不稳定结构域的编码基因与CAR基因末端连接，构建融合基因；具体的，将不稳定结构域的编码基因置于CAR基因的3’端，连接构成融合基因；
②将步骤①所得融合基因克隆插入慢病毒质粒；
③包装病毒，制备携带融合基因的慢病毒；
④用步骤③所得慢病毒感染T细胞并扩增。
4.调节权利要求1所述的含有不稳定结构域的CAR-T细胞功能的方法，其特征在于：加入不稳定结构域对应的小分子化合物。
5.根据权利要求4所述的调节含有不稳定结构域的CAR-T细胞功能的方法，其特征在于：当所述不稳定结构域为二氢叶酸还原酶DHFR的不稳定结构域，对应小分子化合物为甲氧苄啶TMP；当所述不稳定结构域为FKBP12蛋白的不稳定结构域，对应小分子化合物为Shied-1；当所述不稳定结构域为基于雌激素受体配体结合结构域发展的不稳定结构域ERLBP，对应小分子化合物为4-羟基他莫昔芬。
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